[发明专利]一种WH54聚合酶及其在RT-PCR中的应用

说明书

本发明公开了一种WH54聚合酶及其在RT‑PCR中的应用。本发明提供了蛋白质，为如下1)或2)或3)：1)氨基酸序列是序列表中序列2所示的蛋白质；2)在序列表中序列2所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；3)将1)或2)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到具有相同功能的蛋白质。本发明的DNA聚合酶，同时具有逆转录酶活性以及聚合酶活性，可以被应用于one‑step RT‑PCR中，即只需要WH54聚合酶即可完成逆转录及PCR的步骤，简化实验步骤，降低试剂成本。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种WH54聚合酶及其在RT-PCR中的应用。

背景技术

热稳定性的DNA聚合酶已经在很多嗜热微生物中被广泛发现，例如从Thermusaquaticus中分离出了Taq DNA聚合酶，从Pyrococcus furiosus中分离出了Pfu DNA聚合酶，从Pyrococcus sp.KOD1中分离出了KOD DNA聚合酶。这些聚合酶由于其热稳定性，在核酸高温变性的条件下不会失活，是目前核酸扩增的常用酶，在高温扩增反应如PCR、测序反应中都得到广泛应用。

目前RT-PCR分为2种，two-step RT-PCR，即为常规RT-PCR方案，先用逆转录酶和逆转录酶反应体系进行cDNA合成，再以合成的cDNA为模板利用聚合酶和PCR反应体系进行反应；one-step RT-PCR，市面上常见的方案为将逆转录酶和PCR酶混在一起，通过反应buffer的优化来实现一步RT-PCR。需要两个酶进行反应，试剂成本高，而且需要考虑两个酶的反应buffer的兼容性问题，可能因为需要相互妥协无法达到两个酶的最佳活性条件。

发明内容

本发明一个目的是提供一种蛋白质。

本发明提供的蛋白质，为如下1)或2)或3)：

1)氨基酸序列是序列表中序列2所示的蛋白质；

2)在序列表中序列2所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；

3)将1)或2)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到具有相同功能的蛋白质。

上述经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

上述蛋白质具有逆转录酶和/或DNA聚合酶活性。

编码上述蛋白质的核酸分子也是本发明保护的范围。

上述核酸分子为如下(a1)或(a2)或(a3)或(a4)所示的DNA分子：

(a1)编码区包括序列表中序列1的DNA分子；

(a2)核苷酸序列是序列表中序列1的DNA分子；

(a3)与(a1)或(a2)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码上述蛋白质的DNA分子；

(a4)在严格条件下与(a1)或(a2)限定的核苷酸序列杂交，且编码上述蛋白质的DNA分子。

含有上述核酸分子的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系也是本发明保护的范围。

上述蛋白质，或，上述核酸分子，或，上述表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系，在制备逆转录酶中的应用也是本发明保护的范围；

或，上述蛋白质，或，上述核酸分子，或，上述表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系，在制备DNA聚合酶中的应用也是本发明保护的范围；

或上述蛋白质，或，上述核酸分子，或，上述表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系，在制备具有逆转录和DNA聚合双重功能的酶中的应用也是本发明保护的范围。