[发明专利]一种用于检测登革热NS1蛋白的分子印迹聚合物微球及其应用

权利要求书

1.一种用于检测登革热NS1蛋白的分子印迹聚合物微球，其特征在于：包括二氧化硅微球以及覆盖在其表面的分子印迹聚合物层，所述分子印迹聚合物层具有由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽片段形成的空穴；

其中，所述分子印迹聚合物微球的制备方法包括以下步骤：

1)合成硅氧烷功能单体：分别将1mmol的甲基丙烯酸、1mmol的N-叔丁基丙烯酰胺、1mmol的4-乙烯基咪唑与1mmol的3-巯丙基三乙氧基硅烷和5mL的甲醇混合，加人三乙胺调节pH至8.0，60℃水浴反应6h，得到三种油状的硅氧烷功能单体S-M、S-T和S-V；

2)以所述多肽片段为模板，以甲醇为溶剂，配置1mg/L的多肽反应溶液，向5mL所述多肽反应溶液中加入所述硅氧烷功能单体S-M、S-T和S-V，一起混合预作用6小时，其中，S-M、S-T和S-V的摩尔比为1:1:1或1:1:3；

3)活化二氧化硅微球：将10g二氧化硅微球加入250mL浓度为8mol/L的盐酸中，110℃油浴回流反应8h，使二氧化硅微球表面的羟基活化，将产物以5000r/min离心5min分离，去掉上清液，沉淀加入去离子水超声10min，再次离心保留沉淀，重复上述过程至上清液pH＝7，将沉淀进行干燥；

4)进行二氧化硅微球表面印迹聚合反应：向0.2g活化后的二氧化硅微球加入35mL甲醇，超声10min混合均匀并脱气，加入所述硅氧烷功能单体和多肽片段已预作用的甲醇溶液共15mL和2.7mL TEOS作为交联剂，缓慢滴加1.8mL氨水，40℃水浴水解，反应结束后以5000r/min的转速离心分离，去掉上层液体，保留沉淀，加入1％v/v三氟乙酸甲醇溶液超声10min，以5000r/min的转速离心分离，沉淀再次加入无水乙醇，超声10min，并离心分离保留沉淀，交叉加入三氟乙酸甲酸溶液和无水乙醇，重复超声离心步骤至上次液体无法检测出多肽信号为止，沉淀于50℃干燥。

2.根据权利要求1所述的分子印迹聚合物微球用于制备检测登革热NS1蛋白的试剂的用途。

3.一种试剂盒，其特征在于包括根据权利要求1所述的分子印迹聚合物微球。