[发明专利]被覆磷脂双分子层、单磷脂A及环二核苷酸的铝纳米粒疫苗佐剂-传递系统及其制备方法

说明书

本发明属于生物药物技术领域，公开了一种表面覆盖磷脂双分子层的单磷脂A及环二核苷酸共修饰铝纳米粒(PLAN‑MC)疫苗佐剂‑传递系统(VADS)及其制备方法，其佐剂为纳米铝，在铝纳米粒(AN)表面覆盖有磷脂(PL)双分子层，且由单磷脂A(MPLA)和环二核苷酸(cyclic di‑nucleotide,CDN)分子共修饰。该VADS对于接种部位刺激性小，适于多种接种途径，并且具有显著提高疫苗诱导机体形成抗原特异性抗体及细胞毒性T细胞的免疫功能。

技术领域

本发明涉及生物药物技术领域，具体涉及一种被覆磷脂的单磷脂A及环二核苷酸共修饰的铝纳米粒疫苗佐剂-传递系统及其制备方法。

背景技术

疫苗是能够诱导机体产生抗体的免疫原物质，是用于防治传染性疾病、肿瘤、自身免疫性疾病的生物制剂。目前疫苗从主要成分性质上分类，包括如下5种类型。1)灭活疫苗：是采用物理或化学方法直接杀灭病原体，再添加适当辅助成分制成疫苗制剂。此种疫苗进入机体后不能生长繁殖，对机体刺激时间短，要获得持久免疫力需多次重复接种，或加入疫苗佐剂。2)减毒活疫苗：用人工定向诱变方法消除病原体致病性，或从自然界筛选出无毒力的活微生物制成活疫苗。如卡介苗(BCG，结核病)、麻疹疫苗、脊髓灰质炎疫苗(小儿麻痹症)等。接种后在体内有生长繁殖能力，接近于自然感染，可激发机体对病原的持久免疫力。减毒活疫苗的免疫诱导效果较好，但存在基因突变产生致病性的风险，安全性较差。3)核酸疫苗：包括RNA、DNA两种疫苗，是将蛋白抗原的表达基因克隆在表达载体上，注入体内，使其抗原在体内表达后激发机体产生免疫反应，也存在安全性较低等弱点。4)类毒素(外毒素)：是将细菌外毒素经处理消除毒性而保留免疫原性，成为类毒素，通常加适量磷酸铝和氢氧化铝制备为疫苗制剂。常用的类毒素疫苗有白喉、破伤风等类毒素制剂等，一般用作治疗目的。5)亚单位疫苗(纯抗原组分疫苗)：将诱导机体产生免疫的病原体抗原制备为疫苗。亚单位疫苗免疫原性低，需要疫苗佐剂-传递系统。

目前这些不同类型疫苗既各具特点也存在自身不足，突出表现为安全性隐患与免疫激活效力弱两个方面。安全性问题主要由于疫苗成分复杂，尤其是活疫苗，存在变异或恢复致病性风险。效力弱则是亚单位疫苗普遍问题，因为亚单位疫苗只含有抗原成分，缺乏病原体原有的保护成分、病原体相关分子模式(PAMP)等激活机体固有免疫系统的相关成分，往往不能诱导足够免疫反应。

针对上述安全性及效力两个问题，疫苗研究人员发展了一些应对策略。其中，发展新型疫苗佐剂-传递系统(Vaccine adjuvant-Delivery system,VADS)，为提高疫苗效力的有效措施。除传统佐剂铝盐外，皂角苷，角鲨烯，CpG-ODN，cGAMP，乳剂，脂质体，无机纳米粒，高分子纳米载体(如GLPA纳米粒)等，均为目前积极研究的新型VADS。而多种佐剂活性分子与纳米粒子组合形成的VADS兼具佐剂、传递功能，受到广泛重视。这些VADS有效地保护了疫苗抗原(Ag)，提高了疫苗免疫诱导功能，有效地维护了人类健康。但现有疫苗及其佐剂传递系统也存在一些不足，在疫苗诱导效力、稳定性方面，有待于进一步提高。

铝盐是常用的VADS，应用于临床已经有90多年的历史，许多疫苗含有铝盐VADS，如百白破疫苗、流感嗜血杆菌疫苗等。铝佐剂虽然能激活Th2细胞分泌IL-4，进而促进Th2型体液免疫应答产生抗体，但难以有效诱导细胞免疫应答，无法促进机体产生细胞毒性T细胞。此外，铝佐剂还具有的局部刺激性较强等显著弱点此外，传统铝佐剂还有一个突出弱点是，具有较强局部刺激性，常导致接种部位出现炎症反应(Hem SL,Hogenesch H.,Relationship between physical and chemical properties of aluminum-containingadjuvants and immunopotentiation.Expert Rev Vaccines.2007Oct；6(5):685-98.)。

综上，铝盐作为疫苗佐剂，在安全性和免疫刺激效力方面都有待进一步研发优化。

发明内容