[发明专利]肠球菌的恒温核酸同步放大检测方法及其专用检测试剂盒

权利要求书

1.一种肠球菌的恒温核酸同步放大检测试剂盒，其特征在于，包括：

（1）核酸提取液：其包含含有特异性捕获探针A的固相支持物和探针B，其中，

所述捕获探针A用于捕获检测序列，

所述探针B的3’端序列为与靶标序列特异性结合的序列，5’端序列为第一引物的序列，所述第一引物的5’端为启动子序列，3’端序列为与靶标序列不同源的序列；

（2）检测液a：其包含第二引物，所述第二引物与靶标序列的互补序列特异性结合；

（3）检测液b：其包含第一引物和靶标检测探针，其中所述靶标检测探针与所述靶标序列的RNA拷贝特异性结合；

（4）SAT酶液：其包含至少一种可以识别所述启动子序列的RNA聚合酶和逆转录酶；

所述第一引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:2所示；所述第二引物的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示；所述靶标检测探针的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:3所示，靶标检测探针的序列的两端分别携带有荧光报告基团和淬灭基团；

所述固相支持物为磁性颗粒，所述特异性捕获探针A的核苷酸序列如序列表中SEQ IDNO:5所示，所述探针B的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括：

（5）样品保存液，其包含高浓度去垢剂；

（6）肠球菌外标，其为含有系列稀释浓度肠球菌的菌液；

（7）肠球菌阴性对照：其为不含有肠球菌的体系；和

（8）定量标准曲线，其纵坐标为检测荧光dt值，横坐标为肠球菌的浓度Log值。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，

所述检测液a的组分为：10-50mM Tris，5-40 mM KCl，10-40mM MgCl₂，1-10mM NTPS，0.5-5mM dNTPs，1-10％ PVP40，1-10 %甘油，0-25％ DMSO，0.1~0.5μM的第二引物；

所述检测液b的组分为：10-50mM Tris，5-40mM KCl，10-40mM MgCl₂，1-10mM NTPS，0.5-5mM dNTPs，1-10％ PVP40，1-10 %甘油，0.1~0.5μM的第一引物，0.1~0.5μM的靶标检测探针；

所述SAT酶液的组分为：RNA聚合酶200～2000U/反 应、逆转录酶 400～4000U/反应、2～10mM HEPES pH 7.5、10～100mM N-acetyl-L cysteine、0.04～0.4mM zinc acetate、10～100mM trehalose、40～200mM Tris-HCl pH 8.0、40～200mM KCl、1～10mM EDTA、2～20%v/v Triton X-100、10～40% v/v glycerol。

4.一种根据权利要求1-3中任一项所述的试剂盒中的引物和探针组，其包括：

特异性捕获探针A，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:5所示；

探针B，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示；

第一引物，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:2所示；

第二引物，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示；和

靶标检测探针，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:3所示，并在序列的两端分别携带有荧光报告基团和淬灭基团。