[发明专利]一种马氏珠母贝生长性状相关的MIP基因SNP分子标记及其应用

权利要求书

1. 一种马氏珠母贝生长性状相关的MIP基因SNP分子标记的应用，其特征在于：所述的SNP分子标记位于马氏珠母贝胰岛素相关基因的g.38363939 AG和g.38364205 CT位点；

SNP分子标记位点的基因型对马氏珠母贝壳型性状进行早期选育；

其包括如下步骤：

(1)提取待测马氏珠母贝的基因组DNA；

(2)设计特异性扩增含有马氏珠母贝MIP基因所在3号染色体上38363939-38364205位点的基因片段的引物对；

(3)以步骤(2)设计的引物对马氏珠母贝基因组DNA进行PCR扩增，检测扩增所得基因片段的SNP位点的基因型；其中，SNP位点g.38363939为AG、GG基因型的个体的性状均值，壳长、壳宽、壳高、总重与壳重显著大于AA基因型；SNP位点g.38364205为TT、CT基因型的个体的性状均值，壳长、壳宽、壳高、总重及壳重显著大于CC基因型；

(4)基于SNP位点的基因型对马氏珠母贝壳型性状进行早期选育；

所述PCR扩增的引物对的序列如SEQ IDNo.1-2。

2.根据权利要求1所述一种马氏珠母贝生长性状相关的MIP基因SNP分子标记的应用，其特征在于：步骤(1)所述的提取待测马氏珠母贝的基因组DNA的步骤如下：使用试剂盒提取基因组DNA，具体步骤包括：

(1)取0.05g闭壳肌，放入装有200μL缓冲液的高压灭菌过的1.5mL离心管；

(2)剪碎肌肉组织，加入4μL100 mg/mL核糖核酸酶A溶液，振荡15sec，室温放置5min；

(3)加入20μL 20mg/mL蛋白酶K溶液，涡旋混匀，简短离心，56℃放置3h，每小时振荡混合样品2-3次，每次振荡混匀15sec；

(4)加入200μL缓冲液，充分颠倒混匀，70℃放置10min，离心；

(5)加人200μL无水乙醇，充分颠倒混匀，简短离心；

(6)将步骤(5)所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱中，12,000rpm离心30sec，倒掉废液，将吸附柱放回收集管中；

(7)向吸附柱中加入500μL缓冲液，12,000rpm离心30sec，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中；

(8)向吸附柱中加入600μL漂洗液，12,000rpm离心30sec，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中；

(9)重复操作步骤(7)；

(10)将吸附柱放回收集管中，12,000rpm离心2min，倒掉废液，将吸附柱CB3置于室温放置10分钟；

(11)将吸附柱转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100μL洗脱缓冲液，室温放置5min，12,000rpm离心2min，将溶液收集到离心管中。