[发明专利]一种基于嗜盐菌高效生产3-羟基丙酸(3HP)及其衍生物的方法

权利要求书

1.重组嗜盐菌，其包含以1,3-丙二醇为底物生产3-羟基丙酸或其衍生物的代谢路径，其中所述3-羟基丙酸的衍生物为聚3-羟基丙酸酯或3-羟基丙酸与3-羟基丁酸的共聚物，其中所述重组嗜盐菌是缺失了编码胆碱脱氢酶的基因dddA和编码甲基丙二酸半醛脱氢酶的基因dddC并且过表达编码醛脱氢酶的基因aldD_TD和编码醇脱氢酶的基因adhP的嗜盐单胞菌(Halomonas sp.)，其中所述编码醛脱氢酶的基因aldD_TD的序列如SEQ ID NO:5所示，和所述编码醇脱氢酶的基因adhP的序列如SEQ ID NO:6所示，所述编码醛脱氢酶的基因aldD_TD和编码醇脱氢酶的基因adhP处于外源引入的强启动子和强RBS序列控制下，以提高其转录和翻译水平，所述强启动子是序列如SEQ ID NO:7所示的Porin启动子，所述强RBS序列如SEQ IDNO:8所示。

2.根据权利要求1所述的重组嗜盐菌，其中所述3-羟基丙酸的衍生物为聚(3-羟基丁酸-co-3-羟基丙酸)。

3.根据权利要求1所述的重组嗜盐菌，其中所述基因dddA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述基因dddC的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的重组嗜盐菌，其特征还在于：

所述重组嗜盐菌还通过过表达3-羟基丙酸衍生物合成基因来生产3-羟基丙酸共聚物，所述3-羟基丙酸共聚物合成基因为来源于Ralstonia eutropha的序列如SEQ ID NO:8所示的phaC1基因与来源于Chloroflexu aurantiacus的序列如SEQ ID NO:9所示的辅酶A连接酶结构域pcs’基因、来源于Ralstonia eutropha的序列如SEQ ID NO:10所示的乙酰辅酶A合成酶acoE基因、来源于E.coli的序列如SEQ ID NO:11所示的丙酰辅酶A合成酶prpE基因或来源于Salmonella typhimurium的序列如SEQ ID NO:12所示的醛脱氢酶基因pduP的组合。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的重组嗜盐菌，其中所述嗜盐菌的原始菌株为Halomonas bluephagenesis TD01，其菌种保藏编号为CGMCC No.4353。

6.一种制备3-羟基丙酸或其衍生物的方法，所述3-羟基丙酸的衍生物为聚3-羟基丙酸酯或3-羟基丙酸与3-羟基丁酸的共聚物，所述方法包括使用根据权利要求1-5中任一项所述的重组嗜盐菌来生产3-羟基丙酸或其衍生物。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述3-羟基丙酸的衍生物为聚(3-羟基丁酸-co-3-羟基丙酸)。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其中所述方法在开放无灭菌和/或批次或连续发酵的条件下进行，其中将葡萄糖和1,3-丙二醇作为混合碳源。

9.根据权利要求6或7所述的方法，其中所述方法包括在发酵过程中加入乙酸来调节细胞内的氧化还原平衡，和/或通过增加缓冲液的量来提高培养基的缓冲能力，由此增加3-羟基丙酸或其衍生物的产量。