[发明专利]HLA-DPA1基因分型试剂盒

权利要求书

1.一种HLA-DPA1基因分型试剂盒，其特征在于：包括2条扩增引物和4条测序引物，具体如下：

扩增引物：

AMP-DPA1-F3：5’-CTCGGGAGAAGGAACATAAT-3’；如SEQ ID NO.3所示；

AMP-DPA1-R1:5’-TAGAAGATCAATGAACACTTATCAG-3’；如SEQ ID NO.4所示；

测序引物：

CX-DPA1-2F：5’-AAGTCTTTATTCATTCTCTA-3’；如SEQ ID NO.8所示；

CX-DPA1-2R：5’-GGCGACGMCGCTCACCTC-3’；如SEQ ID NO.9所示；

CX-DPA1-3F：5’-GGAGCCCACAGTGACCATCTC-3’；如SEQ ID NO.10所示；

CX-DPA1-3R：5’-CCCATAGTAACAGAAACTCAA-3’；如SEQ ID NO.11所示。

2.权利要求1所述的HLA-DPA1基因分型试剂盒在检测基因分型中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：具体应用时，检测方法如下：

(1)提取样本DNA；

(2)利用扩增引物进行PCR扩增，完成目的基因扩增；

(3)对扩增产物进行双酶切纯化；

(4)利用测序引物，对纯化后的产物进行测序PCR反应；

(5)将上述得到的测序产物进行醋酸钠-乙醇沉淀法纯化，进行毛细管电泳测序；

(6)将上述获得的序列通过分型软件分析，确定HLA-DPA1等位基因型别。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述扩增的反应体系为：模板DNA(30ng/μl)，2μl；正向引物(10pM)，1μl；反向引物(10pM)，1μl；dNTP，1.6μl；10x LA Taq buffer(Mg²⁺)，2μl；增强剂，2μl；10x LA Taq，0.2μl；补ddH₂O至总体积20μl。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述扩增的程序为：94℃变性2min；98℃变性10s，60℃退火30s，72℃延伸5min30 s，共进行30次循环；72℃延伸9min；4℃，∞。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述测序反应程序为：96℃变性10s；96℃变性10s，50℃退火10s，60℃延伸4min，共进行25次循环，12℃，∞。

7.一种利用权利要求1所述的HLA-DPA1基因分型试剂盒进行HLA-DPA1基因分型的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)提取样本DNA；

(2)利用扩增引物进行PCR扩增，完成目的基因扩增；

(3)对扩增产物进行双酶切纯化；

(4)利用测序引物，对纯化后的产物进行测序PCR反应；

(5)将上述得到的测序产物进行醋酸钠-乙醇沉淀法纯化，进行毛细管电泳测序；

(6)将上述获得的序列通过分型软件分析，确定HLA-DPA1等位基因型别。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：所述扩增的反应体系为：模板DNA(30ng/μl)，2μl；正向引物(10pM)，1μl；反向引物(10pM)，1μl；dNTP，1.6μl；10x LA Taqbuffer(Mg²⁺)，2μl；增强剂，2μl；10x LA Taq，0.2μl；补ddH₂O至总体积20μl。

9.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：所述扩增的程序为：94℃变性2min；98℃变性10s，60℃退火30s，72℃延伸5min30 s，共进行30次循环；72℃延伸9min；4℃，∞。

10.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：所述测序反应程序为：96℃变性10s；96℃变性10s，50℃退火10s，60℃延伸4min，共进行25次循环，12℃，∞。