[发明专利]一种酿酒酵母重组菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种酿酒酵母重组菌，其特征在于，所述酿酒酵母重组菌在基因组中整合了RgTAL基因、HpaB基因和HpaC基因，所述RgTAL基因的碱基序列如SEQ ID NO：1所示，所述HpaB基因的碱基序列如SEQ ID NO：2所示，所述HpaC基因的碱基序列如SEQ ID NO：3所示，所述RgTAL基因对应的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示，所述HpaB基因对应的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示，所述HpaC基因对应的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示，所述酿酒酵母重组菌还包括敲除了酿酒酵母染色体上Aro3和Aro10基因；过表达不受酪氨酸反馈抑制的突变体Aro4^K229L和Aro7^G141S基因；过表达运动发酵单胞菌来源的预苯酸脱氢酶TyrC，编码所述预苯酸脱氢酶TyrC的基因序列如SEQ ID NO：4所示，其相应的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示，所述酿酒酵母重组菌的构建方法，包括如下步骤：

1）重组载体pUMRI-13-HpaB-HpaC和pUMRI-11-RgTAL质粒的获得；

2）将重组载体pUMRI-13-HpaB-HpaC导入酿酒酵母得到YCA113-1B；

3）将步骤1）得到的pUMRI-11-RgTAL质粒导入YCA113-1B中得到酿酒酵母重组菌株YCA113-2B；

4）将pUMRI-ΔAro3-Aro4^K229L-Aro7^G141S导入到酿酒酵母重组菌YCA113-2B中，得到重组菌株中YCA113-5B菌株；

5）将pUMRI-ΔAro10-TyrC导入到YCA113-5B菌株中，得到重组菌株YCA113-8B菌株。

2.权利要求1所述的酿酒酵母重组菌的构建方法，其特征在于，所述重组菌的构建方法包括如下步骤：

1）重组载体pUMRI-13-HpaB-HpaC和pUMRI-11-RgTAL质粒的获得；

2）将重组载体pUMRI-13-HpaB-HpaC导入酿酒酵母得到YCA113-1B；

3）将步骤1）得到的pUMRI-11-RgTAL质粒导入YCA113-1B中得到酿酒酵母重组菌株YCA113-2B；

4）将pUMRI-ΔAro3-Aro4^K229L-Aro7^G141S导入到酿酒酵母重组菌YCA113-2B中，得到重组菌株中YCA113-5B菌株；

5）将pUMRI-ΔAro10-TyrC导入到YCA113-5B菌株中，得到重组菌株YCA113-8B菌株。

3.权利要求1所述的酿酒酵母重组菌在咖啡酸的生产中的应用。

4.一种咖啡酸的生产方法，其特征在于，所述方法包括将权利要求1所述的酿酒酵母重组菌进行发酵培养即得。