[发明专利]一种衰老过程中心肌纤维化的生物标志物及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种衰老过程中心肌纤维化的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为甲基化的基质金属蛋白酶9基因。

2.根据权利要求1所述的生物标志物，其特征在于，所述甲基化位点为基质金属蛋白酶9基因的C-G位点。

3.根据权利要求1所述的生物标志物，其特征在于，所述基质金属蛋白酶9基因位点为chr20:44641083，chr20:44641088和chr20:44639200。

4.一种检测如权利要求1-3任一项所述生物标志物的方法，其特征在于，步骤包括：

S1、采用EDTA真空抗凝采血管采集待测者的外周静脉血，分离上层血浆，提取血浆白细胞DNA；

S2、对所述DNA进行简并代表性亚硫酸盐测序检测，然后对所述测序结果进行亚硫酸氢盐扩增子测序验证；

S3、对基质金属蛋白酶9基因位点：chr20:44641083，chr20:44641088和chr20:44639200中C-G位点的甲基化频率进行高精度分析。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，提取血浆白细胞DNA后使用NanoDrop检测和琼脂糖凝胶电泳检测，确认所述DNA的质量。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，进行简并代表性亚硫酸盐测序检测后对文库制备中各步骤的产物进行纯化回收，所述纯化方法为磁珠纯化、纯化柱纯化或琼脂糖胶电泳纯化中的一种或多种。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述高精度分析为Q-PCR验证甲基化结果。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述Q-PCR引物序列为SEQ ID NO.17和SEQID NO.18。

9.一种如权利要求1-3任一项所述生物标志物在制备房颤筛查试剂盒中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括简并代表性亚硫酸盐测序检测时连接的甲基化接头序列SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，以及亚硫酸氢盐扩增子测序验证时使用的特异性引物序列SEQ ID NO.5-SEQ ID NO.16。