[发明专利]一种鉴定玛咖的方法

说明书

本发明公开一种鉴定玛咖的方法，该玛咖的rbcL区序列的核苷酸序列为SEQ ID NO：1，该鉴定方法步骤为：提取待检测样品的DNA作为扩增模板；使用rbcL区序列的上下游引物进行PCR扩增反应得到rbcL区序列；对扩增产物进行测序，并将序列进行匹配比对，通过核对8个位点的碱基信息从而判定待测样品是否为玛咖，相比已有专利或文献中以ITS区序列作为鉴定玛咖的依据，本发明的方法既可以有效地在分子生物学水平上对玛咖进行分子鉴定，还避免了可能发生的ITS被真菌污染的风险，同时具有操作简单、成本低廉等优点，能够实现玛咖及其近缘种以及粉末的快速、准确鉴定。

技术领域

本发明涉及植物种属鉴定技术领域，具体涉及一种鉴定玛咖的方法。

背景技术

玛咖为十字花科独行菜属植物玛咖（Lepidium meyenii）的根，又称为秘鲁人参，原产南美洲4000米以上的安第斯山脉，是当地居民主要的食物来源之一。研究表明，玛咖具有提高生育能力、增强免疫力、抗疲劳、缓解更年期综合征、抗氧化等功能，由于玛咖的这些特殊功效，被国内外广泛应用到保健品和食品行业中。

《中国植物志》（1987版）中记载，独行菜属植物约150种，全世界广泛分布，我国有15种、一个变种，全国各地均有分布，主要有独行菜、家独行菜、绿独行菜、宽叶独行菜等常见种。

核糖体基因组的ITS区序列由于进化速率快、引物通用性好、NCBI数据库中收录的序列数量多、可以提供丰富遗传信息等特点，在植物鉴定中具有优势，但容易受到微生物污染的干扰，这就导致利用ITS鉴别具有一定的局限性。因此，寻找一种简单、有效并可靠的条形码对玛咖进行分子生物学鉴定具有相当重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于针对现有只利用核糖体基因组的ITS区序列进行玛咖鉴定方法所存在的局限性进行改进，即通过一种用于玛咖鉴定的区序列rbcL，同时还提供一种采用区序列rbcL 对玛咖进行精准鉴定的方法。

本发明一种用于玛咖鉴定的区序列rbcL位于叶绿体基因组中，因其具有高分辨率、易于扩增等特点，已应用于植物界物种鉴定及不同分类阶元的分子系统学研究，且rbcL区序列不会受到微生物的污染，具有一定的优势，采用基于上述rbcL区序列能快速地鉴定玛咖，且操作简单且准确度高。

本发明的上述目的是通过如下方案予以实现的：

本发明提供一种鉴定玛咖的方法，采用区序列rbcL，其核苷酸序列记为SEQ IDNo：1。

对待测样品进行鉴定，包括如下步骤：

步骤1：待测样品预处理，提取待测样品的DNA，得到待测样品DNA；

步骤2：rbcL区序列的上、下游引物分别为引物F、引物R，使用rbcL区序列的引物F和引物R分别进行PCR扩增反应，得到待测样品rbcL区序列，所述引物F的核苷酸序列记为SEQ ID No：2，所述引物R的核苷酸序列记为SEQ ID No：3；

上述PCR扩增的反应体系总体积为20μL，该反应体系包含2.5 mmol/L MgCl2的10×PCR Buffer 2 μL、四种2.5 mmol/L单核苷酸1.6 μL、10 μmol/L rbcL引物F 0.8 μL、10μmol/L rbcL引物R 0.8 μL，5U/μL HiFi DNA聚合酶0.1 μL和模板DNA 50 ng，余量为无菌超纯水；所述四种2.5 mmol/L单核苷酸为腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤、胞嘧啶。

上述PCR扩增反应过程依次为：95℃预变性4 min，92℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸1 min，35个循环，72℃延伸10 min。