[发明专利]一种鉴定玛咖的方法

权利要求书

1.一种鉴定玛咖的方法，其特征在于采用区序列rbcL，区序列rbcL核苷酸序列记为SEQID No：1，对待测样品进行鉴定，包括如下步骤：

步骤1：待测样品预处理，提取待测样品的DNA，得到待测样品DNA；

步骤2：rbcL区序列的上、下游引物分别为引物F、引物R，使用rbcL区序列的引物F和引物R分别进行PCR扩增反应，得到待测样品rbcL区序列，所述引物F的核苷酸序列记为SEQ IDNo：2，所述引物R的核苷酸序列记为SEQ ID No：3；

步骤3：将步骤2得到的待测样品rbcL区序列进行比对匹配，如果自序列SEQ ID No：1的5’端起第221位碱基为G、第240碱基为A、第375位碱基为G、第381位碱基为G、第432位碱基为C、第465位碱基为A、第471位碱基为T、第492位碱基为A、则鉴定为玛咖，否则鉴定为不是玛咖。

2.根据权利要求1所述的一种鉴定玛咖的方法，其特征在于待测样品先经过预处理后才进行待测样品的DNA提取，得到待测样品DNA，所述预处理是将待测样品浸泡于质量百分比浓度为75%的乙醇溶液中5 min，之后放置于无菌环境中风干，然后在液氮冷却的条件下研磨至细粉末状，该细粉末状物质即为待测样品。

3.根据权利要求1所述的一种鉴定玛咖的方法，其特征在于所述PCR扩增的反应体系总体积为20μL，该反应体系包含2.5 mmol/L MgCl₂的10×PCR Buffer 2 μL、四种2.5 mmol/L单核苷酸1.6 μL、10 μmol/L rbcL引物F 0.8 μL、10 μmol/L rbcL引物R 0.8 μL，5U/μLHiFi DNA聚合酶0.1 μL和模板DNA 50 ng，余量为无菌超纯水；所述四种2.5 mmol/L单核苷酸为腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤、胞嘧啶。

4.根据权利要求1所述的一种鉴定玛咖的方法，其特征在于所述PCR扩增反应过程依次为：95℃预变性4 min，92℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸1 min，35个循环，72℃延伸10 min。

5.根据权利要求1所述的一种鉴定玛咖的方法，其特征在于将步骤3中待测样品rbcL区序列，再导入软件MEGA，并进行比对。