[发明专利]用于检测牛无角基因的引物组、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于同时检测牛无角基因的引物组，其特征在于，包括：

引物组I：上游引物：

5’-GATAGTTTTCTTGGTAGGCTGGTATTCTT-3’，

5’-GTGAGATAGTTTTCTTTGCTCTTTAGATCA-3’；

下游引物：

5’-TTGGGATAGACTTAAAAATGAAAAGAGAGT-3’；

引物组II：上游引物：

5’-TGTCAAGTGTCTCTGTCAAGAGATTCAG-3’，

5’-CTGTCAAGTGTCTCTGTCAAGATTCAGA-3’；

下游引物：

5’-CCTGCCATGATAAAGATGTTGGCT-3’；

引物组III：上游引物：

5’-CCCCTCCCCTGTGTGTG-3’，

5’-CCCTCCCCTGTGTGCA-3’；

下游引物：

5’-GGAAGAAACCTACATGAGTGAGTG-3’；

引物组IV：上游引物：

5’-CCAGTTTTATCTTTTTCCCCTCCAC-3’；

5’-CCAGTTTTATCTTTTTCCCCTCCAA-3’；

下游引物：

5’-GGTCAGGAGGCAAAACCAACAAT-3’。

2.权利要求1所述的引物组在制备牛无角基因检测试剂中的应用。

3.用于检测牛无角基因的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物组。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR预混液和/或对照品。

5.一种检测牛无角基因的方法，其特征在于，包括：

1)提取待测样品的DNA；

2)利用权利要求1所述的引物组或权利要求3或4所述的试剂盒进行PCR扩增；

3)根据扩增结果，判断所述待测样品是否携带牛无角基因；和/或，判断所述待测样品的牛无角基因型。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，采用KASP进行检测。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤2)中，所述PCR扩增的反应程序如下：

(1)95℃，15min；

(2)95℃，20～30sec，61～55℃，45～60sec，每个循环降低0.6℃，10个循环；

(3)95℃，20～30sec，55℃，45～60sec，26个循环；

(4)37℃，60sec。

8.根据权利要求5或6或7所述的方法，其特征在于，步骤2)中，在进行所述PCR扩增时，针对引物组I～IV分别配置反应体系，1μL反应体系如下：

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，在所述引物混合液中，每条所述上游引物的浓度为8～12μM，每条所述下游引物的浓度为20～30μM。

10.权利要求1所述的引物组、权利要求3或4所述的试剂盒或者权利要求5～9中任一项所述的方法在牛的分子育种中的应用。

11.权利要求1所述的引物组、权利要求3或4所述的试剂盒或者权利要求5～9中任一项所述的方法在牛有角或无角性状早期预测中的应用。

12.权利要求1所述的引物组、权利要求3或4所述的试剂盒或者权利要求5～9中任一项所述的方法在筛选无角牛、或淘汰有角牛中的应用。