[发明专利]一种萝卜根肿病抗性鉴定的方法有效
| 申请号： | 202010484886.7 | 申请日： | 2020-06-01 |
| 公开（公告）号： | CN111424111B | 公开（公告）日： | 2022-07-19 |
| 发明（设计）人： | 柳李旺;孟玥;徐良;王燕;张婉婷;张晓莉 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学;南京莱福佳农业科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 傅婷婷;徐冬涛 |
| 地址： | 211225 江苏省南京市溧*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 萝卜 根肿病 抗性 鉴定 方法 | ||
1.萝卜根肿病抗性功能标记RsNBS135C的特异性引物在鉴别萝卜根肿病抗性中的应用，其特征在于所述的特异性引物的上游引物RsNBS135C-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示， 下游引物RsNBS135C-R的核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示；扩增结果中若检测到453bp的单条带，则待鉴定萝卜植株为抗根肿病；若检测到421bp的单条带或453bp、421bp双条带，则待鉴定萝卜植株为不抗根肿病；所述的根肿病由芸薹根肿病菌4号生理小种所致。
2.一种萝卜根肿病抗性鉴定的方法，其特征在于包含以下步骤：
（1）提取萝卜待测材料的嫩叶的基因组DNA；
（2）用权利要求1中所述的特异性引物对步骤（1）提取的基因组DNA进行PCR扩增；
（3）扩增产物进行电泳：3%琼脂糖凝胶电泳检测，140V电泳35min，紫外凝胶成像仪下照相，并观察扩增结果；
（4）判断：扩增结果中若检测到453bp的单条带，则待鉴定萝卜植株为抗根肿病；若检测到421bp的单条带或453bp、421bp双条带，则待鉴定萝卜植株为不抗根肿病；所述的根肿病由芸薹根肿病菌4号生理小种所致。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的PCR的反应体系：10μL体系，包括含Mg2+的10×PCR Buffer 1.0μL，10μmol/L的 dNTPs 0.2μL，10μmol/L的 RsNBS135C-F、RsNBS135C-R各0.5μL，5U/μL 的Taq酶 0.1μL，10ng/μL模板DNA 1.0μL，ddH2O补足至10μL，混匀，离心。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的PCR的扩增程序为：94℃预变性3min；94℃变性50s，56℃退火50s，72℃延伸30s， 35个循环；72℃延伸10min，最后4℃保存。
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