[发明专利]肠道病毒EV71、CA16、EV通用型核酸检测试剂

权利要求书

1.肠道病毒EV71、CA16、EV通用型核酸检测试剂，其包括反应液1和反应液2；

所述反应液1包括：肠道病毒EV71、CA16、EV的引物和探针、Tris-HCl、氯化钾、硫酸铵、叠氮钠、PEG2000和亚精胺；

所述反应液2包括醋酸镁和叠氮钠；

所述肠道病毒EV71、CA16、EV的引物和探针包括：

EV71病毒特异性上游引物，其序列如SEQ ID NO:1所示；

EV71病毒特异性下游引物，其序列如SEQ ID NO:2所示；

EV71病毒特异性探针，其序列如SEQ ID NO:3所示；

CA16病毒特异性上游引物，其序列如SEQ ID NO:4所示；

CA16病毒特异性下游引物，其序列如SEQ ID NO:5所示；

CA16病毒特异性探针，其序列如SEQ ID NO:6所示；

EV病毒通用型上游引物，其序列如SEQ ID NO:7所示；

EV病毒通用型下游引物，其序列如SEQ ID NO:8所示；

EV病毒特异性通用型探针，其序列如SEQ ID NO:9所示。

2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述反应液1中包括如下浓度的：Tris-HCl 1mol/L；氯化钾 1wt%~20wt%；硫酸铵 2 vol %~30 vol %；叠氮钠 0.05wt%~2wt%；PEG2000 0.05 vol%~5vol%；亚精胺 0.05 wt%~5wt%。

3.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述反应液2中，醋酸镁的浓度为2~20mM；叠氮钠的浓度为 0.05wt%~2wt%。

4.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述反应液1中还包括内标基因的引物和探针；所述内标基因为人18S rRNA基因；

人18S rRNA基因的上游引物，其序列如SEQ ID NO:10所示；

人18S rRNA基因的下游引物，其序列如SEQ ID NO:11所示；

人18S rRNA基因的探针序列，其序列如SEQ ID NO:12所示。

5.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，反应液1包括：

EV71病毒特异性上游引物 0.2μmol/L~1.0μmol/L；

EV71病毒特异性下游引物 0.2μmol/L~1.0μmol/L；

EV71病毒特异性探针 0.2μmol/L~1.0μmol/L；

CA16病毒特异性上游引物 0.2μmol/L~1.0μmol/L；

CA16病毒特异性下游引物 0.2μmol/L~1.0μmol/L；

CA16病毒特异性探针 0.2μmol/L~1.0μmol/L；

EV病毒通用型上游引物 0.2μmol/L~1.0μmol/L；

EV病毒通用型下游引物 0.2μmol/L~1.0μmol/L；

EV病毒通用型探针 0.2μmol/L~1.0μmol/L；

人18S rRNA基因的上游引物 0.2μmol/L~1.0μmol/L；

人18S rRNA基因的下游引物 0.2μmol/L~1.0μmol/L；

人18S rRNA基因的探针序列 0.2μmol/L~1.0μmol/L；

dUTP 0.2mmol/L~0.8mmol/L；dATP 0.2mmol/L~0.8mmol/L；

dCTP 0.2mmol/L~0.8mmol/L；dGTP 0.2mmol/L~0.8mmol/L；

DNA聚合酶 10U；反转录酶 10U；尿嘧啶DNA糖基化酶 0.1U；

Tris-HCl 1mol/L；氯化钾 1wt%~20wt%；硫酸铵 2 vol %~30 vol %；

叠氮钠 0.05wt%~2wt%；PEG2000 0.05~5vol%；亚精胺 0.05~5wt%。