[发明专利]一种高通量药敏检测试剂盒及其使用方法和应用

说明书

本发明属于药物筛选技术领域，本发明提供了一种高通量药敏检测试剂盒及其使用方法和应用。本发明的高通量药敏检测试剂盒，包括培养容器、培养基和检测试剂，所述检测试剂是包括吩嗪甲基硫酸盐衍生物和含四氮唑盐的氧化试剂的混合物。本发明提供的高通量药敏检测试剂盒具有快速精准、经济简便、安全无毒、可以目测、临床相关性高的特点，使用方法简单，具有较高的精准性、灵敏性，且能够一次性筛查大量的抗菌药物。

技术领域

本发明涉及药敏检测技术领域，尤其涉及一种高通量药敏检测试剂盒及其使用方法和应用。

背景技术

结核病(Tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌所引起的一种慢性空气传染疾病，虽然结核分枝杆菌主要是侵染肺部，但是它几乎可以侵入人体全身的各种器官，它一直是威胁全球人类健康的重大公共卫生问题。非结核分枝杆菌(Nontuberculosismycobacteria，NTM)是指除结核杆菌及麻风杆菌以外的所有分枝杆菌，也称为环境分枝杆菌。非结核分枝杆菌广泛存在于自然界的土壤、尘埃、水、鱼类和家禽中，传播途径主要是从环境中获得感染，例如污水，而人与人之间的传染极少见。非结核分枝杆菌属于条件致病菌，健康人的呼吸道可有某些类型的非结核分枝杆菌寄植，当口腔和呼吸道卫生状况改善后可消失。通常非结核分枝杆菌对人类致病性较结核分枝杆菌低，但如果存在易感因素，使宿主局部或全身免疫功能发生障碍，也可导致病变。迄今为止，结核病已有几千年的历史，随着环境的改变耐药结核杆菌也随之出现，而在过去的40年中却未开发出能有效杀灭耐药菌株的新型抗结核药物，未来数年内可能会出现以耐药甚至耐多药结核杆菌为主的结核病的流行趋势，全球医疗工作者将会面临更加严重的挑战。

目前现有的结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的药敏检测方法主要是细菌培养法和分子生物学方法。(1)细菌培养法主要分为固体培养和液体快速培养。固体培养法主要是利用罗氏固体培养基，将菌种接种到固体斜面上，置于37℃培养，按时间进行观察，根据菌落形态，初次生长的时间，以及是否产生色素等特点来进行判断是否为结核分枝杆菌。此法是目前全球普遍采用的细菌分离培养法，方法简便，但是由于细菌生长缓慢，导致其耗时长，一般要4～8周才能报道结果，而且其特异性差，不利于临床初断。近年来，以液体培养法为基础的细菌培养方法得到了广泛的应用。目前，常用的自动检测仪器有BACTEC MGIT 960系统、BacT/ALERT 3D微生物检测系统、Versa TREK/ESP培养系统Ⅱ等。上述液体培养法虽然缩短了培养时间，提高了灵敏性，但是也存在判定方法不直观、污染率高、价格昂贵、工作量大的缺点，限制了一些中小型的实验室以及高负担资源的国家采用这些设备。(2)分子生物学方法。近年来，随着分子生物学技术的不断发展，其在分枝杆菌中的应用也不断增多，目前临床诊断实验室最常用的分子生物学技术有核酸杂交探针、线性杂交检测、DNA测序等。但是分子生物学方法步骤繁多，每个药的检测成本高。比色法检测多步操作，在微孔板中进行，精准度不高。可见，现有的结核病的药敏检测方法均存在一些缺陷。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高通量药敏检测试剂盒及其使用方法和应用，本发明的药敏检测试剂盒具有高通量、快速精准、经济简便、安全无毒、可以目测、临床相关性高的特点，能够发现传统方法发现不了的异质性耐药。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

一种高通量药敏检测试剂盒，包括培养容器、培养基和检测试剂，所述检测试剂是包括吩嗪甲基硫酸盐衍生物和含四氮唑盐的氧化试剂的混合物。

优选的，所述检测试剂中所述含四氮唑盐的氧化试剂的浓度为0.001～10mM，所述吩嗪甲基硫酸盐衍生物的浓度为0.1～250μM。

优选的，所述含四氮唑盐的氧化试剂在氧化还原后具有吸光度或荧光度，所述含四氮唑盐的氧化试剂为单磺酸四氮唑盐、羧酸四氮唑盐、2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐、3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐和四氮唑蓝盐中的一种。