[发明专利]一种高通量药敏检测试剂盒及其使用方法和应用

权利要求书

1.一种高通量药敏检测试剂盒，其特征在于，包括培养容器、培养基和检测试剂，所述检测试剂是包括吩嗪甲基硫酸盐衍生物和含四氮唑盐的氧化试剂的混合物。

2.如权利要求1所述的一种高通量药敏检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂中所述含四氮唑盐的氧化试剂的浓度为0.001～10mM，所述吩嗪甲基硫酸盐衍生物的浓度为0.1～250μM。

3.如权利要求1或2所述的一种高通量药敏检测试剂盒，其特征在于，所述含四氮唑盐的氧化试剂在氧化还原后具有吸光度或荧光度，所述含四氮唑盐的氧化试剂为单磺酸四氮唑盐、羧酸四氮唑盐、2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐、3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐和四氮唑蓝盐中的一种。

4.如权利要求1或2所述的一种高通量药敏检测试剂盒，其特征在于，所述吩嗪甲基硫酸盐衍生物的结构通式为：

其中，R表示1～18个碳原子的直链、支链或环状烷基，或者表示包含N、O、S、P、Si和卤素原子中的一种或几种杂原子的1～18个碳原子的直链、支链或环状烷基衍生物。

5.权利要求1～4任意一项所述的一种高通量药敏检测试剂盒用于筛选抗结核病药物的应用。

6.权利要求1～4任意一项所述的一种高通量药敏检测试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将按照终浓度配制的不同浓度梯度的待检药物包被到培养容器中制得含药培养容器；

(2)将活菌与培养基、检测试剂混合，加入到含药培养容器中，封存培养，每天检测培养液在OD450nm处的吸光度，绘制生长曲线；以待检药物浓度为0的生长曲线为活菌的标准生长曲线，设为对照组，其他设为加药组；并设立空白组，所述空白组与加药组的区别在于没有加活菌；培养至对照组与空白组在OD450nm处的吸光度的比值为3时，培养结束；并根据对照组的标准生长曲线和加药组的生长曲线数据计算细胞活力值，绘制药物剂量效应曲线；

(3)按照如下公式计算细胞活力值：

细胞活力值(％)＝[OD(加药)-OD(空白)]/[OD(对照)-OD(空白)]×100

其中：OD(加药)：表示具有活菌、培养基、检测试剂、待检药物的培养液在OD 450nm处的吸光度；

OD(对照)：表示具有活菌、培养基、检测试剂的培养液在OD 450nm处的吸光度；

OD(空白)：表示具有培养基、检测试剂、待检药物的培养液在OD 450nm处的吸光度；

(4)根据含药培养容器中培养液的颜色变化，获得最低抑菌浓度值，或根据EZMTT法测得的待测药物各浓度梯度的生长曲线对照标准生长曲线，获得最低抑菌浓度值，或根据药物剂量效应曲线，获得最低抑菌浓度值，将获得的最低抑菌浓度值与CLSI标准中对应的最低抑菌浓度值比较，判定是否耐药。