[发明专利]一种纳米开关分子及其控制激活的实体瘤靶向性CAR-T细胞

权利要求书

1.一种带有“纳米开关”的可控性实体瘤CAR-T细胞治疗系统的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）制备纳米开关分子；

2）构建组装型CAR-T质粒；

3）制备组装型CAR-T细胞：将步骤2）构建成功的组装型CAR-T质粒转染T淋巴细胞；

4）制备实体瘤靶向性CAR-T细胞：步骤3）转染成功的组装型CAR-T细胞培养液胞吞步骤1）制备的纳米开关分子，通过开关分子定点激活组装型CAR-T细胞以获得实体瘤靶向性CAR-T细胞；

步骤2）中，组装型CAR-T质粒的构建步骤为：利用基因重组技术将T2A元件、FRB序列、FKBP序列和靶向实体瘤的ScFv段导入CAR-T质粒中构建组装型CAR-T质粒；

步骤3）中，组装型CAR-T质粒通过慢病毒转染法或电穿孔转染法转染入T细胞中；

所述纳米开关分子的制备方法，具体包括以下步骤：

步骤一）将疏水性的开关分子与肿瘤靶向性纳米载体溶于二氯甲烷溶液中，构成有机相，混合液A；

步骤二）将混合液A加入含有 3% 聚乙烯醇的第一外水相中并采用超声乳化技术充分混合，形成混合液B，其中mPEG-PEP-PCL两嵌段共聚物在水相中自组装为高分子纳米粒子且亲水端向外，疏水端向内；

步骤三）将混合液B加入含1% 聚乙烯醇的第二外水相中并采用超声乳化技术充分混合，形成混合液C；

步骤四）将混合液C通过常温磁力搅拌挥发，去除有机溶剂，得到负载开关分子的肿瘤靶向性纳米粒子。

2.根据权利要求1所述的带有“纳米开关”的可控性实体瘤CAR-T细胞治疗系统的制备方法，其特征在于：所述的开关分子为赤霉素或雷帕霉素或雷帕霉素衍生物。

3.根据权利要求1所述的带有“纳米开关”的可控性实体瘤CAR-T细胞治疗系统的制备方法，其特征在于：所述的肿瘤靶向性纳米载体为明胶酶靶向纳米粒子或磁靶向纳米粒子或热靶向纳米粒子或环境响应靶向纳米粒子。

4.根据权利要求1~3任一项所述的带有“纳米开关”的可控性实体瘤CAR-T细胞治疗系统的制备方法所制得的带有“纳米开关”设计的实体瘤靶向性CAR-T细胞治疗系统。

5.权利要求1~3任一项所述的带有“纳米开关”的可控性实体瘤CAR-T细胞治疗系统的制备方法在制备实体瘤靶向性药品中的应用。