[发明专利]一种共羧化酶及其四水合物或盐的制备方法

权利要求书

1.一种如式I所示的共羧化酶的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：将含如式I所示的共羧化酶的混合物使用弱碱性阴离子交换树脂依次经水和pH＝10-12弱碱性水溶液作为洗脱液洗脱，收集洗出液，得到含如式I所示的共羧化酶的水溶液即可；所述的含共羧化酶的混合物中包括硫胺素一磷酸酯和所述的如式I所示的共羧化酶；

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，

所述的弱碱性阴离子交换树脂为大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂；

和/或，所述的水为纯水；

和/或，所述的pH＝10-12弱碱性水溶液为使用氨水调节得到；

和/或，所述的含如式I所示的共羧化酶的混合物中还含有硫胺素、硫胺素三磷酸酯和高级磷酸酯中的一种或多种；

和/或，所述的经水洗脱为洗脱至洗出液中硫胺素一磷酸酯含量低于百分之一即可。

3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述的弱碱性阴离子交换树脂为下列型号之一：D315、D301、D335或D345；

和/或，所述的收集洗出液为收集如式I所示的共羧化酶纯度大于95％洗出液。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的含如式I所示的共羧化酶的混合物采用如下步骤制备得到：步骤(1)，将水和醇类溶剂依次加入到维生素B1与磷酸化剂进行磷酸化反应后的反应液中进行混合、静置后的上清液除去，得到所述的含如式I所示的共羧化酶的混合物的粗品；

步骤(2)，将上述的粗品和水形成的溶液，使用水不溶性叔胺、或水不溶性叔胺与有机溶剂的混合溶剂进行洗涤，得到所述的含如式I所示的共羧化酶的混合物即可。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，

步骤(1)中，所述的磷酸化剂为焦磷酸，焦磷酸与五氧化二磷或三氯氧磷的混合物，磷酸与五氧化二磷进行反应制备得到的含焦磷酸的混合物，和高浓度磷酸中的一种或多种；

和/或，步骤(1)中，所述的醇类溶剂为异丙醇和/或乙醇；

和/或，步骤(1)中，所述的醇类溶剂与所述的维生素B1的体积质量比为2:1-5:1；

和/或，步骤(1)中，所述的水与所述的维生素B1的体积质量比为2:1-5:1；

和/或，所述的磷酸化反应的温度为100℃-170℃；

和/或，步骤(2)中，所述的水与所述的维生素B1的体积质量比为1:1-3:1；

和/或，步骤(2)中，所述的水不溶性叔胺为12至36个碳原子的：脂族叔胺、脂族-环脂族叔胺和脂族-芳脂族叔胺中的一种或多种；

步骤(2)中，所述的有机溶剂为具有4至8个碳原子的醇类溶剂、具有4至8个碳原子的醚类溶剂、具有5至8个碳原子的酮类溶剂和芳烃类溶剂中的一种或多种；

步骤(2)中，基于所述的混合溶剂的所述的水不溶性叔胺质量百分比含量为10％至80％。