[发明专利]胞外多糖及其制备方法和应用

说明书

本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及一种胞外多糖及其制备方法和应用。本发明提供的胞外多糖包括：由葡萄糖和甘露糖形成的主链，由半乳糖连接所述主链形成的侧链；以摩尔比计算，所述甘露糖、葡萄糖和半乳糖的单糖比例为(3.5‑4.5):(6.5‑7.5):(0.8‑1.5)。该胞外多糖的制备方法包括：将菌株Cs‑HK1进行液体发酵，收集发酵液；将发酵液进行醇沉处理以及脱蛋白处理，制得多糖粗提物；将多糖粗提物用水溶解，进行凝胶柱层析。该方法简便，操作简单，易于规模化量产。经测试，由上述方法制得的胞外多糖具有良好抗炎活性，显示出很好的药物应用前景。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及一种胞外多糖及其制备方法和应 用。

背景技术

炎症是机体对体内平衡和精细调节的防御反应，包含对组织损伤、感染或 由严格控制的炎症反应引起的其他刺激的复杂的病理保护反应。然而，过度的 炎症反应可能造成人体免疫调节系统的异常，从而导致宿主机体产生许多有害 的慢性炎症疾病。自从炎症被认为与各种疾病密切相关以来，对炎症潜在机制 以及抗炎活性药物的研究成为了本领域技术人员的研究热点

发明内容

本发明的主要目的在于筛选具有良好药物应用前景的抗炎活性药物，其具 体技术方案如下：

为实现该发明目的，第一方面，本发明提供了一种胞外多糖，包括：由葡 萄糖和甘露糖形成的主链，由半乳糖连接所述主链形成的侧链；以摩尔比计算， 所述甘露糖、葡萄糖和半乳糖的单糖比例为(3.5-4.5):(6.5-7.5):(0.8-1.5)。

第二方面，本发明提供了一种胞外多糖的制备方法，包括以下步骤：

提供菌株Cs-HK1，所述菌株Cs-HK1为中国弯颈霉属，保藏在中国微生物 菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号 院3号，保藏号为CGMCC No.6004，保藏时间为2012年4月16日；

将所述菌株Cs-HK1进行液体发酵，收集发酵液；

将所述发酵液进行醇沉处理以及脱蛋白处理，制得多糖粗提物；

将所述多糖粗提物用水溶解，进行凝胶柱层析，制得所述胞外多糖。

第三方面，本发明提供了前述胞外多糖或由上述制备方法制得的胞外多糖 在制备具有抗炎活性的功能制剂中的应用。

本发明提供的胞外多糖，包括具有特定单糖摩尔比例的葡萄糖、甘露糖和 半乳糖，由葡萄糖和甘露糖形成主链，由半乳糖连接主链形成侧链，经体外细 胞抗炎活性测试，上述胞外多糖具有良好抗炎活性，显示出很好的药物应用前 景。

本发明提供的上述胞外多糖的制备方法，主要通过以菌株Cs-HK1为发酵 菌株进行液体发酵，然后对发酵液的逐级纯化分离获得。该方法简便，操作简 单，易于规模化量产。

基于上述胞外多糖良好的抗炎活性，前述菌株、上述胞外多糖或由上述制 备方法制得的胞外多糖可应用于制备具有抗炎活性的功能制剂，包括但不限于 药物、保健食品、化妆品等。

附图说明

图1为实施例1中多糖粗提物EPS80采用GPC法检测的结果；

图2为实施例1中DEAE-Sephadex A-25柱的洗脱程序以及洗脱液的吸光 度检测结果；

图3为实施例1中superdex 200pg柱的洗脱液的吸光度检测结果；

图4为EPS80-1对经LPS诱导的THO-1细胞表达NF-κB炎症信号激活的 抑制效果；

图5为EPS80-1对经LPS诱导的THP-1细胞表达一氧化氮(NO)的抑制 效果；

图6为EPS80-1对经LPS诱导的THP-1细胞表达IL-1β的抑制效果；