[发明专利]胞外多糖及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种胞外多糖，其特征在于，所述胞外多糖由至少两个结构单元组成，所述结构单元包括：第一葡萄糖、第二葡萄糖、第三葡萄糖、第一甘露糖、第二甘露糖和第一半乳糖，所述第一葡萄糖以1,5-糖苷键连接所述第一甘露糖，所述第一甘露糖以1,5-糖苷键连接所述第二甘露糖，所述第二甘露糖以1,6-糖苷键连接所述第二葡萄糖，所述第二葡萄糖以1,6-糖苷键连接所述第三葡萄糖，且所述第一半乳糖以1,3-糖苷键连接所述第一葡萄糖；

所述胞外多糖的分子结构包括：

；

其中，n表示所述结构单元的个数，为350-400之间的正整数；

β-D-Galp为β-D-半乳糖；

6)-β-D-Glcp-(1为C₆和C₁分别与相邻单糖形成糖苷键的β-D-葡萄糖；

[5)-β-D-Manf-(1]₂为C₅和C₁分别与相邻单糖形成糖苷键的β-D-甘露糖，且所述β-D-甘露糖的重复次数为2；

[6)-α-D-Glcp-(1]₂为C₆和C₁分别与相邻单糖形成糖苷键的α-D-葡萄糖，且所述α-D-葡萄糖的重复次数为2；

所述胞外多糖的制备方法包括以下步骤：

提供菌株Cs-HK1，所述菌株Cs-HK1为中国弯颈霉属，保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号为CGMCC No. 6004，保藏时间为2012年4月16日；

将所述菌株Cs-HK1进行液体发酵，收集发酵液；

将所述发酵液进行醇沉处理以及脱蛋白处理，制得多糖粗提物；

将所述多糖粗提物用水溶解，进行凝胶柱层析，制得所述胞外多糖；

其中，将所述发酵液进行醇沉处理以及脱蛋白处理的步骤包括：

按照乙醇的最终体积百分比浓度为35%-40%的比例，将所述发酵液与乙醇混合，进行第一醇沉处理，离心，获得第一上清液；

按照乙醇的最终体积百分比浓度为78%-84%的比例，将所述第一上清液与乙醇混合，进行第二醇沉处理，离心，获得第二上清液；

提供Sevag试剂，将所述第二上清液与所述Sevag试剂混合，进行脱蛋白处理；

进行凝胶柱层析的步骤包括：

配制多糖粗提物水溶液，将所述多糖粗提物水溶液上载于DEAE-SephadexA-25柱上，采用蒸馏水以及氯化钠的摩尔浓度为0.1-1M的氯化钠水溶液进行洗脱，收集馏分；

将所述馏分上载于superdex 200 pg柱上，采用碳酸氢铵的摩尔浓度为 0.1-0.3M碳酸氢铵水溶液进行洗脱。

2.一种权利要求1所述的胞外多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

提供菌株Cs-HK1，所述菌株Cs-HK1为中国弯颈霉属，保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号为CGMCC No. 6004，保藏时间为2012年4月16日；

将所述菌株Cs-HK1进行液体发酵，收集发酵液；

将所述发酵液进行醇沉处理以及脱蛋白处理，制得多糖粗提物；将所述发酵液进行醇沉处理以及脱蛋白处理的步骤包括：按照乙醇的最终体积百分比浓度为35%-40%的比例，将所述发酵液与乙醇混合，进行第一醇沉处理，离心，获得第一上清液；按照乙醇的最终体积百分比浓度为78%-84%的比例，将所述第一上清液与乙醇混合，进行第二醇沉处理，离心，获得第二上清液；提供Sevag试剂，将所述第二上清液与所述Sevag试剂混合，进行脱蛋白处理；

将所述多糖粗提物用水溶解，进行凝胶柱层析，制得所述胞外多糖；进行凝胶柱层析的步骤包括：配制多糖粗提物水溶液，将所述多糖粗提物水溶液上载于DEAE-SephadexA-25柱上，采用蒸馏水以及氯化钠的摩尔浓度为0.1-1M的氯化钠水溶液进行洗脱，收集馏分；将所述馏分上载于superdex 200 pg柱上，采用碳酸氢铵的摩尔浓度为 0.1-0.3M碳酸氢铵水溶液进行洗脱。