[发明专利]一种核酸跨膜运输载体及其制备方法

权利要求书

1.一种核酸跨膜运输载体的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

1）脂肪酸改性壳聚糖的制备：所述脂肪酸改性壳聚糖由壳聚糖与脂肪酸在酸性水溶液以及有机溶剂A组成的混合液中，活化剂以及缚酸剂的存在下反应得到；

2）核酸跨膜运输载体的制备：所述的核酸跨膜运输载体由脂肪酸改性壳聚糖、胆固醇以及待包封的核酸类物质，利用挤出法获得；具体步骤为：

（1）将壳聚糖溶于乙酸溶液中，然后滴加溶有缚酸剂、活化剂和脂肪酸的有机溶剂A，搅拌反应3小时，有机相旋转蒸发至干，洗涤、冷冻干燥至恒重，得到淡黄色脂肪酸改性壳聚糖；

（2）将步骤（1）得到的脂肪酸改性壳聚糖以及适量胆固醇溶于有机溶剂B，加入待包封的核酸类物质溶液，乳化得到W/O初乳，将W/O初乳加入到10倍体积的水中混合，乳化得到W/O/W乳液，利用旋转蒸发去除有机溶剂，利用挤出法制备得到核酸跨膜运输载体；

所述步骤（1）中的壳聚糖分子量为10000-100000；

所述步骤（1）中的壳聚糖、脂肪酸、活化剂以及缚酸剂的摩尔比为：（0.1～1.0）:1.0:1.5:2.0；

所述步骤（2）中的脂肪酸改性壳聚糖、胆固醇以及核酸类物质的质量比为：（2.0～10.0）:（0.1～1.0）:1；

脂肪酸改性壳聚糖中氨基糖区域氨基的pka在6.5以下，能够为核酸类物质提供亲和性高的结合区域；

所述的核酸跨膜运输载体由原料和负载药物组成，所述原料包括脂肪酸改性壳聚糖和胆固醇，所述负载药物为核酸类物质；所述脂肪酸改性壳聚糖由“糖酯区域”和“氨基糖区域”构成，

图示如下：

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2.根据权利要求1所述的核酸跨膜运输载体的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中的有机溶剂A为二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙酸甲酯中的一种。

3.根据权利要求1所述的核酸跨膜运输载体的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中的脂肪酸为棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、α-亚麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸中的一种或几种的混合物；所述活化剂为甲酰氯、乙酰氯、二氯亚砜、光气、三光气、DCC中的一种；所述的缚酸剂为三乙胺、三甲胺、氢氧化钠、氢氧化钾中的一种。

4.根据权利要求1所述的核酸跨膜运输载体的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中的有机溶剂B为甲醇、乙醇、丙酮、丁酮中的一种。

5.根据权利要求1所述的核酸跨膜运输载体的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中的核酸类物质为siRNA、反义寡核苷酸、微RNA、antagomir、微RNA抑制剂、免疫刺激性核酸或U1接头。