[发明专利]含有枯草芽孢杆菌漆酶的直接胆红素检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种含有枯草芽孢杆菌漆酶的直接胆红素检测试剂盒，由试剂R1、试剂R2、试剂R3和试剂R4组成：试剂R1包括：缓冲液100mmol/L、甘露醇10‑250mmol/L、亚硝酸钠0.05‑0.2g/L、叠氮化钠0.2‑2g/L、乙二胺四乙酸钠0.001‑5g/L、余量为水；试剂R2包括：缓冲液100mmol/L、KCl 100mmol/L、聚乙二醇‑600 5‑500g/L、余量为水；试剂R3：枯草芽孢杆菌漆酶；试剂R4：直接胆红素标准品。本发明试剂盒中的枯草芽孢杆菌漆酶发酵周期短、生产成本低、可实现快速大批量生产。利用本发明试剂盒对样品进行检测，稳定性好，成本低。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种检测试剂，具体涉及含有枯草芽孢杆菌漆酶的直接胆红素检测试剂盒。

背景技术

胆红素是红细胞中铁卟啉化合物的主要代谢产物，其结构组成是四个吡咯环通过分子中甲基桥相连而成。血液中红细胞破坏后释放的血红素在血红素氧化酶的作用下生成胆绿素，又经胆绿素还原酶的作用下产生胆红素。胆红素分为直接胆红素与间接胆红素，间接胆红素与直接胆红素之和就是总胆红素。直接胆红素又称结合胆红素，是由间接胆红素进入肝后受肝内葡萄糖醛酸基转移酶的作用与葡萄糖醛酸结合生成的。胆红素是是肝功能的一项重要指标，总胆红素与直接胆红素的测定在临床上有着非常重要的意义。胆红素总量增高、间接胆红素增高表明：溶血性贫血、血型不合输血、恶性疾病、新生儿黄疸等；直接与间接胆红素均增高表明：急性黄疸型肝炎、慢性活动性肝炎、肝硬变、中毒性肝炎；胆红素总量增高、直接胆红素增高表明：肝内及肝外阻塞性黄疸、胰腺癌、毛细胆管型肝炎及其他胆汁瘀滞综合症；因此，对人体的血清、血浆或尿液中直接胆红素的测定以及成分的分析是临床医学检验最常规的项目之一，对疾病的治疗具有非常重要的意义。

目前临床常用测定直接胆红素的方法有重氮试剂法、钒酸盐氧化法、酶法等。重氮试剂法应用最早且目前应用仍然非常广泛，但试剂稳定性较差、线性较低、质量不好控制、抗干扰能力弱；与重氮试剂法相比，钒酸盐氧化法具有比较好的相关性，且试剂的稳定性比较好，因此近年发展比较迅速。但抗干扰能力也相对较弱，结果常出现负值。酶法测定胆红素具有操作简单、特异强、精密度高、抗干扰能力强等的特点，近年来在临床应用方面逐渐广泛。然而，由于一般的胆红素氧化酶的保存时间短、生产成本高，使得酶法检测胆红素试剂价格昂贵，在临床推广应用方面处于劣势。鉴于现有技术上的缺陷，迫切需要开发一种稳定性好、结果准确可靠、生产成本低的直接胆红素的检测试剂盒。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种含有枯草芽孢杆菌漆酶的直接胆红素检测试剂盒。

本发明的技术方案概述如下：

一种利用枯草芽孢杆菌漆酶制备直接胆红素检测试剂盒，由试剂R1、试剂R2、试剂R3和试剂R4组成：

所述试剂R1包括：缓冲液100mmol/L、甘露醇10-250mmol/L、亚硝酸钠0.05-0.2g/L、叠氮化钠0.2-2g/L、乙二胺四乙酸钠0.001-5g/L、余量为水；

所述试剂R2包括：缓冲液100mmol/L、KCl 100mmol/L、聚乙二醇-600 5-500g/L、余量为水；

所述试剂R3：枯草芽孢杆菌漆酶；

所述试剂R4：直接胆红素标准品。

试剂R1中的缓冲液为pH＝4.5-6.0的邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液、pH＝4.5-6.0的柠檬酸钠-乳酸缓冲液、pH＝4.5-6.0的甘氨酸-盐酸缓冲液或pH＝4.5-6.0的乙酸-乙酸钠缓冲液。

试剂R2中的缓冲液为pH＝4.5-6.0的邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液、pH＝4.5-6.0的柠檬酸钠-乳酸缓冲液、pH＝4.5-6.0的甘氨酸-盐酸缓冲液或pH＝4.5-6.0的乙酸-乙酸钠缓冲液。

枯草芽孢杆菌漆酶用下述方法获得：