[发明专利]一种鉴定牛源大肠杆菌毒力的秀丽隐杆线虫模型

说明书

本发明公开一种鉴定牛源大肠杆菌毒力的秀丽隐杆线虫模型，包括以下步骤：将秀丽隐杆线虫同期化处理；将大肠杆菌培养形成菌苔；将已同期化处理的秀丽隐杆线虫置于含有大肠杆菌菌苔的培养基中，即为鉴定牛源大肠杆菌毒力的秀丽隐杆线虫模型；所述的同期化处理为经裂解、离心、沉淀后培养40~60h，获得同期化的L4期线虫；所述大肠杆菌先置于LB固体培养基37℃培养18 h~24 h后，再置于LB肉汤中37℃摇床中摇菌18 h~24 h，最后置于SK培养基中置于20℃生化培养箱中过夜烘干形成菌苔。本发明建立线虫模型更加快速简便，节省时间和成本，可以用秀丽隐杆线虫致病模型来研究病原菌的致病机制，并进一步做抗菌药物的筛选。

技术领域

本发明涉及生物模型技术领域，尤其涉及一种鉴定牛源大肠杆菌毒力的秀丽隐杆线虫模型。

背景技术

大肠杆菌(Escherichia coli)是肠杆菌科，埃希菌氏属，革兰阴性短杆菌，大小0.5× 1～3μm，是肠道正常菌群的重要组成部分，一般不具有致病性，但一些特殊血清型可引起人和动物的严重腹泻和败血症，统称为致病性大肠杆菌。根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为以下6种:肠致病性大肠杆菌(EPEC)、肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠出血性大肠杆菌(EHEC)、肠黏附性大肠杆菌(EAEC)和弥散粘附性大肠杆菌 (DAEC)。随着广西养牛业的发展，规模化养牛场越来越普遍，致病性大肠杆菌给养牛业也带来重大的经济损失，寻找关键的解决方法迫在眉睫。

秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)是一种生活在土壤中的小型线虫，以细菌为食，作为一种典型的模式生物，秀丽隐杆线虫有以下几个特点：身体透明，结构简单，显微镜下易于观察；生命周期短，分为4个阶段：胚胎发育期、生长发育期、生殖期和生殖后期。在20℃的环境下，3.5d即可完成一个生命周期，可大大缩短试验时间；基因序列已知，每一个细胞的起源都完全清楚；遗传序列与哺乳动物有40％的同源性等。这些特性使得秀丽隐杆线虫与小鼠、大鼠、兔子等实验动物相比有极大的简便性和实用性，更节约时间、精力和成本。目前秀丽隐杆线虫已广泛应用于毒理学、疾病模型、病原菌致病模型等研究。秀丽隐杆线虫用于衰老研究、药物毒理、药物筛选等的报道屡见不鲜，目前，研究者已建立了50多种线虫模型，其中包括细菌、真菌和病毒。细菌有鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌等。但牛源大肠杆菌感染秀丽线虫的致病模型国内鲜见报道。本试验以小鼠和秀丽隐杆线虫两种试验动物做对照，同时感染临床中分离到的13株牛源大肠杆菌，来比较大肠杆菌对二者的影响，以期寻找更简便快捷的方法研究致病菌的致病机理，为临床抗感染提供科学的用药依据。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种鉴定牛源大肠杆菌毒力的秀丽隐杆线虫模型，为牛源大肠杆菌感染提供更简便快捷的方法研究致病菌的致病机理，利用兽用抗菌药对致病模型进行药物拯救，并便于牛源大肠杆菌感染的防治及药物的筛选。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种鉴定牛源大肠杆菌毒力的秀丽隐杆线虫模型，包括以下步骤：

(1)将秀丽隐杆线虫同期化处理；

(2)将大肠杆菌在SK培养基中培养形成菌苔；

(3)将已同期化处理的秀丽隐杆线虫置于含有大肠杆菌菌苔的培养基中，即鉴定牛源大肠杆菌毒力的秀丽隐杆线虫模型；

所述的同期化处理为经裂解、离心、沉淀后培养40～60h，获得同期化的L4期线虫；

所述大肠杆菌先置于LB固体培养基37℃培养18h～24h后，再置于LB肉汤中37℃摇床中摇菌18h～24h，最后置于SK培养基中置于20℃生化培养箱中过夜烘干形成菌苔。

优选地，所述同期化处理过程的裂解时间为4～5min。