[发明专利]一种鉴定牛源大肠杆菌毒力的秀丽隐杆线虫模型

权利要求书

1.一种鉴定牛源大肠杆菌毒力的秀丽隐杆线虫模型，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将秀丽隐杆线虫同期化处理；

（2）将大肠杆菌在SK培养基中培养形成菌苔；

（3）将已同期化处理的秀丽隐杆线虫置于含有大肠杆菌菌苔的培养基中；即为鉴定牛源大肠杆菌毒力的秀丽隐杆线虫模型；

所述的同期化处理为经裂解、离心、沉淀后培养40~60h，获得同期化的L4期线虫；

所述大肠杆菌先置于LB固体培养基37 ℃培养18 h~24 h后，再置于LB肉汤中37 ℃摇床中摇菌18 h ~24 h，最后置于SK培养基中置于20 ℃生化培养箱中过夜烘干形成菌苔。

2.根据权利要求1所述鉴定牛源大肠杆菌毒力的秀丽隐杆线虫模型，其特征在于，所述同期化处理过程的裂解时间为4~5min。

3.根据权利要求1所述鉴定牛源大肠杆菌毒力的秀丽隐杆线虫模型，其特征在于，所述述同期化处理过程的离心转速为2500~3500r/min，离心时间为1~3min。

4.根据权利要求2所述鉴定牛源大肠杆菌毒力的秀丽隐杆线虫模型，其特征在于，所述的裂解的裂解液先置于20 ℃、150 r/min的摇床中震荡20 h。

5.根据权利要求1所述鉴定牛源大肠杆菌毒力的秀丽隐杆线虫模型，其特征在于，所述同期化处理过程的培养是将离心管底部的L1期线虫转移到洁净的NGM板中，置于20 ℃生化培养箱中40-~60 h后即得到同期化的L4期线虫。

6.根据权利要求1所述鉴定牛源大肠杆菌毒力的秀丽隐杆线虫模型，其特征在于，所述的大肠杆菌采取病死牛的内脏或粪便，大肠杆菌单个菌落进行革兰氏染色，镜检，并接种于麦康凯培养基上，37 ℃培养 18～24 h，进一步纯化后接种于营养肉汤内进行再次培养。

7.根据权利要求6所述鉴定牛源大肠杆菌毒力的秀丽隐杆线虫模型，其特征在于，所述的大肠杆菌的DNA需抽提进行PCR反应。

8.根据权利要求7所述鉴定牛源大肠杆菌毒力的秀丽隐杆线虫模型，其特征在于，所述的PCR反应引物序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。

9.根据权利要求7所述鉴定牛源大肠杆菌毒力的秀丽隐杆线虫模型，其特征在于，所述的PCR反应体系为：2×ES Taq MasterMix 25μL，上下游引物各2 μL，模板4 μL，ddH2O补足至50μL；反应程序为：95 ℃预变性5 min，94 ℃变性30 S,52 ℃退火30 S，72 ℃延伸1min，35个循环，72 ℃终延伸10 min。

10.一种利用权利要求1所述利用鉴定牛源大肠杆菌毒力的秀丽隐杆线虫模型建立的牛源大肠杆菌毒力-秀丽隐杆线虫致病模型在药物筛选中应用。