[发明专利]一种新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测技术

说明书

本专利属于医疗体外诊断领域，涉及一种新型冠状病毒2019‑nCoV核酸检测技术，步骤包括样品制备及RNA提取、反应体系配置和PCR扩增、质量控制和结果分析与判定。本专利操作简便、特异性强、准确度高且可重复性强，可在新型冠状病毒肺炎疑似病例确诊、解除隔离和出院标准判断过程中发挥重要作用。

技术领域

本专利属于医疗体外诊断领域，涉及一种新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测技术，尤其是涉及一种操作简便、特异性强、准确度高且可重复性强的新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测技术。

背景技术

在2019-nCoV的防控过程中，快速检测试剂发挥了非常重要的作用。快速诊断试剂的灵敏性、特异性和稳定性对于2019-nCoV病例的早期发现、早期隔离和早期治疗具有非常重要的意义，也是目前控制病毒传染源最可靠的方法。快速诊断分抗原检测和抗体检测两类，抗原检测方法包括检测病毒表面抗原蛋白和检测特异核酸片段，用于确认体内是否存在病原体，适用于疾病潜伏期、急性期或病程初期。抗体检测一般用于判断病程进展程度或用于判断是否发生既往感染。兼具特异性、灵敏度、易操作、时间短等优势的聚合酶链式反应(P CR)、胶体金或荧光层析等技术是临床体外诊断常用的方法。

新型冠状病毒2019-nCoV属于RNA病毒，其全基因序列早于2020年1月11日发布(由上海市公共卫生临床中心和公共卫生学院、华中科技大学武汉中心医院、武汉市疾控中心、中国疾控中心传染病预防控制所联合澳大利亚悉尼大学联合完成)，为反转录加实时聚合酶链式反应法(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)扩增病原体核酸 (RNA)并实现新型冠状病毒2019-nCoV的快速检测提供了理论依据。其中，核酸序列、引物序列及探针的设计，以及多目标序列同步扩增或分步筛查确认的检测方式选择，是影响检测方法的灵敏度和准确性的关键因素。

因此，开发一种操作简便、特异性强、准确度高且可重复性强的新型冠状病毒2019-nC oV核酸检测技术具有重要意义。

发明内容

本专利的有益之处在于，可以提供一种操作简便、特异性强、准确度高且可重复性强的新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测技术。

为实现上述功能，本专利涉及的一种新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测技术，其特征在于，步骤如下：

1)样品制备及RNA提取

a.在生物安全柜内，取0.5mL溶液A，将咽拭子浸泡到溶液A中充分搅拌，并将棉拭子中的液体在管壁挤干净，盖上管盖，充分混匀，室温放置5min；

b.在上述溶液中加入100μL的溶液B，充分混匀，室温放置3min；

c.12000rpm 4℃离心10min，取上清液；

d.将上清液加入1/2体积的溶液C，室温静置2min，并转移到核酸分离管；

e.12000rpm 4℃离心30s；

f.将离心管中的液体倒掉后，在核酸分离管中加入洗液D 500μL，8000rpm 4℃离心 1min；

g.重复步骤f；

h.倒掉离心管中的液体，12000rpm 4℃离心2min，将核酸分离管甩干；

i.将核酸分离管放到新的离心管，加入20-50μL的洗脱液E，静置2min，12000rpm离心1min；

2)反应体系配置和PCR扩增