[发明专利]一种区分香蕉枯萎病抗感品种的CAPS标记方法

说明书

本发明提供了一种区分香蕉枯萎病抗感品种的CAPS标记方法，通过对中热1号和巴西蕉进行测序和分析，得到可用于区分中热1号和巴西蕉InDel突变，该突变导致基因序列对BclI内切酶消化的差异，基于此，设计了区分香蕉枯萎病抗感品种的CAPS标记方法，能直接反映植株的抗性，不存在由于遗传交换而造成的错误鉴定，可有效鉴别主栽品种巴西蕉及其辐射诱变育种选育出的抗病品种中热1号，极大地提高了抗性基因的选择效率，而且利用该标记方法在香蕉苗期鉴定不仅可以节约田间育种成本，还可以大大提高抗枯萎病香蕉品种的选择进程，为香蕉抗性突变育种奠定基础。

技术领域

本发明属于分子生物技术领域，具体而言，涉及一种区分香蕉枯萎病抗感品种的CAPS标记方法。

背景技术

酶切扩增多态性序列(Cleaved amplified polymorphic sequence,CAPS)是PCR反应和限制性内切酶酶切相结合产生的一种分子标记方法。其基本原理是先用已知位点的DNA序列设计一套特异性PCR引物，扩增后用一种专一性的限制性内切酶酶切所得的扩增产物进行限制性片段长度多态性分析。CAPS标记具有共显性、特异性、操作简单和成本低的特点，目前主要用于植物基因定位、分型、图位克隆和品种品系鉴定等方面的研究。

香蕉是一种重要的果粮兼备的热带经济作物。目前全世界有130多个国家种植香蕉。我国种植面积为41.28万公顷(不含台湾)，产量达1085万吨，产值为29.7亿美元，位居世界第二(FAOSTAT,2014)。香蕉产业已成为我国热带农业的支柱性产业，在南方热区经济和农村社会发展中发挥着十分重要的作用。目前，香蕉产业中面临的突出问题主要有：一是主栽品种单一，优良品种缺乏。无论我国还是其他各产蕉国，其主栽品种基本都以卡文迪许类的巴西、威廉斯为主，长期单一栽培和无性繁殖导致其种性退化。各产蕉区长期遭受各种病虫害的威胁，特别是香蕉枯萎病已给香蕉产业带来毁灭性的打击。二是育种手段匮乏，新品种选育困难。香蕉主栽品种为三倍体，育种方式难以采用杂交育种，而以辐射诱变为主的香蕉育种方式需要保持大量的筛选群体，且优株筛选多以形态标记为主，导致其育种存在筛选周期长，人工、土地等成本太高。

因此，香蕉生产上急需优良品种及开发可用于诱变后代早期选择的有效分子标记或手段。从基因水平解析香蕉优异性状相关基因的遗传机制，开发用于早期筛选鉴定的分子标记，对于香蕉分子育种辅助选择和品种选育具有重要指导和实践意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的不足，基于中热1号香蕉和巴西蕉的InDel标记，提供了一种区分香蕉枯萎病抗感品种的CAPS标记方法，能够有效鉴别主栽品种巴西蕉及其辐射诱变育种选育出的抗病品种中热1号，可应用于香蕉抗感品种鉴定，为香蕉抗性突变育种奠定基础。

中热1号是采用巴西蕉通过⁶⁰Coγ射线辐射诱变定向选育获得的香蕉抗枯萎病新品种，已于2017年04月05日申报植物新品种权保护，申请号20172338.6。

本发明的第一个方面是提供一种区分香蕉枯萎病抗感品种的CAPS标记方法，包括以下步骤：

(1)提取待测香蕉基因组DNA；

(2)以待测香蕉基因组DNA为模板，利用特异性引物对进行PCR扩增反应，所述特异性引物对为：

正向引物G0629F2：5'-TAGCAAAATACATGAACTTTTGGA-3'，

反向引物G0629R2：5'-TCCTCACGACAACAACGAGAAAAAG-3'；

(3)将扩增产物用BclI限制性内切酶进行酶切，获得酶切产物，并对酶切产物凝胶电泳，若获得两条片段，则为巴西蕉，若获得三条片段，则为中热1号香蕉。