[发明专利]一种单纯疱疹病毒1型和2型分型核酸检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种单纯疱疹病毒1型和2型分型核酸检测试剂盒，该试剂盒包括PCR反应液1、PCR反应液2、阴性对照和阳性对照；PCR反应液1包括：HSV‑1型上游引物、下游引物、荧光探针；HSV‑2型上游引物、下游引物、荧光探针；DNA聚合酶，尿嘧啶DNA糖基化酶，dNTP，PCR缓冲物，PCR扩增增强剂，防腐剂，水；PCR反应液2包括醋酸锰、防腐剂、水。本发明操作方便，试剂2‑8℃保存，检测灵敏度高、特异性好、可重复性强、检测结果快速。采用本发明试剂盒可以实现单管对单纯疱疹病毒1型和2型特异性DNA核酸片段同时进行分型荧光PCR定性检测，为诊断单纯疱疹病毒感染提供可靠的分子诊断依据。

技术领域

本发明涉及病原体检测技术领域，特别涉及一种单纯疱疹病毒1型和2型分型核酸检测试剂盒。

背景技术

单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus，HSV)属于疱疹病毒科α病毒亚科双链DNA病毒，根据抗原性不同分为1型和2型，即HSV-1和HSV-2，两型核苷酸序列有50％同源性。1型主要由口唇病灶获得，主要感染头部(眼、口、唇)的皮肤黏膜及躯干上部皮肤以及中枢神经系统，引起单纯疱疹性脑炎、疱疹性角膜炎、口腔疱疹性、皮炎等；HSV-2可从生殖器病灶分离到，主要引起生殖器部位的皮肤黏膜疱疹及新生儿感染。单纯疱疹病毒在全球广泛分布，人群中感染极为普遍，潜伏和复发感染者较多。患者和带毒者是该病的传染源，可通过皮肤、粘膜的直接接触或性接触途径进入机体。临床上对两种亚型感染的预后和处理方法不同，因此对HSV感染进行诊断和分型具有重要的临床意义和流行病学意义。

目前HSV检测包括病毒分离培养、血清学检测和分子诊断学方法。病毒分离培养主要是细胞培养检测；血清学检测包括抗体检测和抗原检测，主要使用化学发光法和酶联免疫法；分子诊断学方法包括基因测序及核酸检测方法。传统培养法特异性和敏感性高，但临床检测时间长(至少需要24-48h)，过程繁琐，且阳性率受到多种因素影响，不适用于大范围检测。血清学方法由于窗口期的存在，诊断存在滞后性，不能准确反映当前是否感染，虽然特异性可高达95％，但是敏感性不够，检测率较低。基因测序具有成本昂贵、步骤复杂繁琐、耗时长等缺点，不适宜临床检测用。而核酸荧光PCR检测法具有快速性、准确性和高灵敏性等优点，能够对感染作出早期诊断，适合临床筛查及诊断，同时给疫情的快速分析和控制提供了有力的技术支撑。研究显示，实时荧光PCR检测方法与标准的病毒培养方法在HSV检测的敏感性和特异性方面均能达到90％以上。因此，在国内采用实时荧光PCR技术进行HSV核酸检测是最快速、可靠的方法。

但是常规PCR荧光定量检测DNA扩增采用热启动Taq酶扩增体系，RNA扩增采用Taq酶和反转录Mlv酶扩增体系，二者选用的Buffer也不一样，两种扩增体系不能实现统一。在检测时间方面，DNA扩增需要约1.5h，RNA扩增需要约2h，耗时也较长。并且热启动Taq酶扩增试剂储存条件必须为-20℃保存，干冰或冰袋运输，有效期较短，在使用和运输过程中不便捷。现有的多重PCR技术仍存在检测特异性差、灵敏度低等缺点。另外扩增试剂使用外源性质粒作为内标，仅对提取和扩增的过程进行监控。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种单纯疱疹病毒1型和2型分型核酸检测试剂盒。该试剂盒操作方便，试剂2-8℃保存，检测灵敏度高、特异性好、可重复性强、检测结果快速。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种单纯疱疹病毒1型和2型分型核酸检测试剂盒，试剂盒包括PCR反应液1、PCR反应液2、阴性对照和阳性对照；

PCR反应液1包括如下组分：

如SEQ ID NO：1所示的HSV-1型上游引物，如SEQ ID NO：2所示的HSV-1型下游引物，如SEQ ID NO：3所示的HSV-1型荧光探针；