[发明专利]检测SLC25A13基因突变的方法、引物及探针组合物、试剂盒在审
| 申请号： | 202010052765.5 | 申请日： | 2020-01-17 |
| 公开（公告）号： | CN111073959A | 公开（公告）日： | 2020-04-28 |
| 发明（设计）人： | 郑建权;刘晶晶;刘福平 | 申请（专利权）人： | 深圳会众生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 深圳市博锐专利事务所 44275 | 代理人： | 汤星星 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市宝安区航*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 slc25a13 基因突变 方法 引物 探针 组合 试剂盒 | ||
1.一种检测SLC25A13基因高频突变位点的引物及探针组合物，其特征在于，包括以下至少一对引物及探针组合物：用于检测c.851_854del4突变位点的第一引物和第一探针；用于检测c.1638_1660dup突变位点的第二引物和第二探针；用于检测IVS6+5G﹥A突变位点的第三引物和第三探针；以及用于检测IVS16ins3kb突变位点的第四引物和第四探针；
其中，第一引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1-2所示，第一探针的核苷酸序列如SEQ IDNo.3所示；第二引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4-5所示，第二探针的核苷酸序列如SEQ IDNo.6所示；第三引物的核苷酸序列如SEQ ID No.7-8所示，第三探针的核苷酸序列如SEQ IDNo.9所示；第四引物的核苷酸序列如SEQ ID No.10-12所示，第四探针的核苷酸序列如SEQID No.13所示。
2.根据权利要求1所述的检测SLC25A13基因高频突变位点的引物及探针组合物，其特征在于，所述第一探针、第二探针、第三探针和第四探针的3’和5’端分别进行荧光标记。
3.根据权利要求1所述的检测SLC25A13基因高频突变位点的引物及探针组合物，其特征在于，包括：用于检测c.851_854del4突变位点的第一引物和第一探针；用于检测c.1638_1660dup突变位点的第二引物和第二探针；用于检测IVS6+5G﹥A突变位点的第三引物和第三探针；以及用于检测IVS16ins3kb突变位点的第四引物和第四探针。
4.一种检测SLC25A13基因高频突变位点的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3中任意一项所述的检测SLC25A13基因高频突变位点的引物及探针组合物。
5.根据权利要求4所述的检测SLC25A13基因高频突变位点的试剂盒，其特征在于，包括权利要求3所述的检测SLC25A13基因高频突变位点的引物及探针组合物、PCR缓冲液、dNTPs和DNA聚合酶；
所述PCR缓冲液包括10mmol/L的Tris-HCl、50nmol/L的KCl和5mmol/L的Mg2+；所述dNTPs的浓度为2-5mmol/L；所述DNA聚合酶为1-2U。
6.一种检测SLC25A13基因高频突变位点的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取样品DNA；
(2)采用PCR溶解曲线法，利用权利要求4或5所述的检测SLC25A13基因高频突变位点的试剂盒对样品DNA进行PCR扩增；
(3)通过监测整个溶解过程当中的信号值随温度的变化规律，区分靶序列的基因型。
7.根据权利要求6所述的检测SLC25A13基因高频突变位点的方法，其特征在于，步骤(2)中，利用权利要求5所述的检测SLC25A13基因高频突变位点的试剂盒对样品DNA进行PCR扩增；采用PCR溶解曲线法进行PCR扩增的反应条件为：
第一阶段：90-98℃，5-10min，1个循环；
第二阶段：90-98℃，10-15s；60-65℃，30-60s；68-72℃，30-60s；40个循环；
第三阶段：90-98℃，1-10s；40-50℃，1-10s；1个循环；
第四阶段：由40-50℃至80-90℃，升温速率为0.1/s，并收集荧光信号；1个循环。
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