[发明专利]一种双价支气管炎核酸疫苗、制备方法及用途

权利要求书

1.一种双价传染性支气管炎核酸疫苗，其特征在于其氨基酸序列包含：

1）流感病毒血凝素信号肽序列；

2）M41株S1蛋白部分氨基酸序列；

3）连接12氨基酸lingker；

4）H120株S1蛋白部分氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的双价传染性支气管炎核酸疫苗，其特征在于，所述核酸疫苗的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.根据权利要求1所述的双价传染性支气管炎核酸疫苗，其特征在于，所述核酸疫苗的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

4.根据权利要求1所述的双价传染性支气管炎核酸疫苗，其特征在于，所述核酸疫苗选用鼠伤寒沙门氏菌作为质粒载体。

5.根据权利要求1所述的双价传染性支气管炎核酸疫苗，其特征在于，所述核酸疫苗中含有有鸡β-actin启动子的PCAGGS表达质粒。

6.根据权利要求1所述的双价传染性支气管炎核酸疫苗，其特征在于，所述核酸疫苗的表达序列插入到PCAGGS载体的1718bp碱基ECORI酶切位点及1810bp碱基BgiII酶切位点之间位置。

7.根据权利要求6所述的双价传染性支气管炎核酸疫苗，其特征在于，所述核酸疫苗经过密码子适应性优化后，前端加入Kozak序列ACCACCATGGCC，核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

8.权利要求1所述的双价传染性支气管炎核酸疫苗的制备方法，其特征在于其步骤包括：

选定伤寒沙门氏菌做为核酸疫苗质粒载体菌种，接种于培养基中培养，收集菌体沉淀；菌体转入4℃的冷超纯水中，适应30min以上，冷水冲洗3遍，离心，最后用300μl冷超纯水重悬，制备感受态细胞；运用伯乐电转仪，选用板间距为0.2cm电转杯，电转参数设置电压1450V，电激时间2ms，进行电转，电转完成后，所有液体转移人5ml 麦康凯液体培养基，37℃，过夜培养；取培养物100μl，涂在含氨苄西林的麦康凯固体平板上37℃培养过夜，挑取阳性菌落，即获得核酸疫苗。

9.权利要求1-3任一项所述的双价传染性支气管炎核酸疫苗在用于制备对病毒M41毒株及H120毒株有免疫保护作用的制剂中的用途。

10.根据权利要求9所述的双价传染性支气管炎核酸疫苗在用于制备对病毒M41毒株及H120毒株有免疫保护作用的制剂中的用途，其特征在于，所述的核酸疫苗用于预防禽类传染性支气管炎。