[发明专利]扩增方法

说明书

本发明一般涉及扩增感兴趣的核酸区的改进方法和用于其中的引物。更具体地，本发明涉及扩增由两个或多个免疫球蛋白或T细胞受体基因片段重组产生的核酸区的改进方法和用于其中的引物。本发明的方法基于以下确定：使用显示高Tm的引物和/或使用高退火温度进行扩增步骤，可以实现比先前在现有技术的扩增重排的免疫或T细胞受体基因的方法中可获得的更高水平的灵敏度。当主题引物与重组基因的至少两个N区杂交时，可实现敏感性的还进一步改善。提供检测特异性免疫和T细胞受体核酸重组事件的高度灵敏但简单的方法可用于多种应用，包括但不限于：诊断和/或监测克隆淋巴样细胞群体或疾病病症，所述克隆淋巴样细胞群体或疾病病症特征在于特异性V/D/J重组事件(诸如检测白血病中的微小残留病)或分析或鉴定感兴趣的免疫或T细胞受体基因区。

技术领域

本发明一般涉及扩增感兴趣的核酸区的改进方法和用于其中的引物。更具体地，本发明涉及扩增由两个或多个免疫球蛋白或T细胞受体基因片段重组产生的核酸区的改进方法和用于其中的引物。本发明的方法基于以下确定：使用显示高Tm的引物和/或使用高退火温度进行扩增步骤，可以实现比先前在现有技术的扩增重排的免疫或T细胞受体基因的方法中可获得的更高水平的灵敏度。当主题引物与重组基因的至少两个N区杂交时，可实现敏感性的进一步改善。提供检测特异性免疫和T细胞受体核酸重组事件的高度灵敏但简单的方法可用于多种应用，包括但不限于：诊断和/或监测克隆淋巴样细胞群体或疾病病症，或分析或鉴定感兴趣的免疫或T细胞受体基因区，克隆淋巴样细胞群体或疾病病症的特征在于特异性V/D/J重组事件(诸如检测白血病中的微小残留病)。

背景技术

本说明书中对任何在先出版物(或由其衍生的信息)，或对任何已知或未知的物质的引用，并且不应被视为对下述的承认或认可或任何形式的暗示：在先出版物(或由其衍生的信息)或已知的物质形成本说明书所致力的领域的公知常识的一部分。

本说明书中对任何在先出版物(或由其衍生的信息)，或对任何已知或未知的物质的引用，并且不应被视为对下述的承认或认可或任何形式的暗示：在先出版物(或由其衍生的信息)或已知的物质形成本说明书所涉及的致力的领域的公知常识的一部分。

本说明书中作者引用的出版物的著录细节按字母顺序收集在说明书末尾。

克隆通常被理解为已经从共同的前体细胞传代的细胞群。诊断和/或检测受试者中细胞或生物体的克隆群体的存在通常构成了相对成问题的程序。具体地，克隆群体可以仅构成细胞或生物体的较大群体内的次要组分。例如，就哺乳动物生物体而言，在肿瘤(诸如癌症)的诊断和/或检测方面发生需要检测细胞克隆群体的更常见情况之一。然而，在诊断诸如骨髓增生异常或真性红细胞增多症等病症以及检测由免疫系统产生的抗原驱动的克隆中，一种或多种克隆群体的检测也可能很重要。

通常，产生克隆的群体对应于身体的特定组织或区室中的细胞群体。然而，尽管对这样的细胞群进行采样有效地将检查缩小到细胞或生物的亚组，但是这仍然可能向临床医师呈现非克隆细胞或生物的大背景群，在所述非克隆细胞或生物的大背景群内必须鉴定克隆群。

如果所述克隆的成员的特征在于分子标记,诸如DNA的改变的序列，则所述检测问题可以转化为在具有不同序列的较大分子群体内检测全部具有相同分子序列的分子群体的问题，所述较大分子群体或者全部相同或者不同，或者在更大或更小程度上是异源的。可以实现的标记分子的检测水平非常取决于检测方法的灵敏度和特异性，但是几乎总是，当较大分子群体中的靶分子的比例变得小时，来自较大群体的信号噪音使得不可能检测来自靶分子的信号。

尽管是高度特异性的，但是在其检测方面呈现独特复杂性的一类特定分子标记是那些由遗传重组事件产生的标记。

遗传物质在体细胞中的重组涉及将最初分离的基因组的两个或更多个区集合在一起。它可以作为随机过程发生，但也作为正常淋巴细胞发育过程的一部分发生。