[发明专利]蛋白质-多核苷酸缀合物的检测测定

权利要求书

1.一种检测样品中蛋白质-多核苷酸缀合物分子的方法，所述方法包括：

(a)使所述样品与跟标签共价连接的三链体形成型寡核苷酸(TFO)在允许所述TFO与所述缀合物分子中的多核苷酸杂交的条件下接触，从而形成杂交混合物；

(b)使所述杂交混合物与包含捕获试剂的表面接触，所述捕获试剂与共价连接至所述TFO的标签特异性结合；

(c)使所述表面与检测试剂接触，其中所述检测试剂包含与结合伴侣偶联的可检测标记，所述结合伴侣与所述缀合物分子中的蛋白质特异性结合；并且

(d)检测来自所述可检测标记的信号。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述标签是半抗原。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述半抗原是生物素、地高辛或2,4-二硝基苯酚。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述捕获试剂是与所述标签特异性结合的抗体。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述标签是生物素，并且所述捕获试剂是链霉亲和素。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述标签是地高辛，并且所述捕获试剂是与地高辛特异性结合的抗体。

7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述结合伴侣是与所述缀合物分子中的蛋白质特异性结合的抗体。

8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述可检测标记是荧光团、金属纳米颗粒、酶或电化学发光(ECL)发光团。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述ECL发光团是钌络合物。

10.如权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述TFO包含锁核酸(LNA)单体和脱氧核糖核苷酸的混合物。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述TFO中约30％至约40％的核苷酸是LNA单体。

12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述TFO的长度为至少15个核苷酸。

13.如权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述TFO具有在其整个长度上与所述缀合物分子中的多核苷酸的序列互补的序列。

14.如权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述缀合物分子中的多核苷酸是siRNA、shRNA、miRNA、前miRNA或反义寡核苷酸。

15.如权利要求14所述的方法，其中所述缀合物分子中的多核苷酸是包含正义链和反义链的siRNA，并且其中所述TFO具有与所述正义链的序列互补的序列。

16.如权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述缀合物分子中的蛋白质是抗体或其抗原结合片段。

17.如权利要求16所述的方法，其中所述缀合物分子中的蛋白质是抗体，并且所述结合伴侣是所述抗体的靶抗原、抗Fc区抗体或抗独特型抗体。

18.如权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述缀合物分子中的蛋白质是细胞表面受体的配体。

19.如权利要求18所述的方法，其中所述结合伴侣是所述受体或其配体结合片段。

20.如权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述蛋白质-多核苷酸缀合物分子是抗体-siRNA缀合物分子。