[发明专利]一种鉴别鱼翅种的DNA条形码引物对、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种鉴别鱼翅种的DNA条形码引物对、试剂盒及方法。本发明的引物对的上、下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示，利用该引物对对待测鱼翅样品DNA进行PCR扩增，然后对PCR产物进行测通及拼接获取COI序列，将获得的COI序列进行数据库比对及聚类分析鉴定，从而确定待测鱼翅样品的种属。本发明的引物对能够鉴别13种鱼翅物种，分子系统发育树显示，同一个物种的不同个体基本都能形成单系，节点支持率为99％～100％，聚类分析显示，同一物种都位于同一个分支，且不同个体的鱼类的COI序列相似度均大于95％；该方法可为市场流通的鱼翅制品的鉴定提供分子生物学基础。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种鉴别鱼翅种的DNA条形码引物对、试剂盒及方法。

背景技术

鱼翅作为著名的养生保健佳品，一直深受消费者的喜爱，价格一度水涨船高。市场流通多为加工后的干鱼翅制品，但由于鲨鱼物种种类繁多，相似物种之间外观形态差异小，通过传统形态学鉴定难以保证干鱼翅制品标识的准确性，造成不良商家以次充好，更有不法生产者从濒危鲨鱼上采集鱼翅。

DNA条形码技术是利用生物体线粒体DNA中一段保守片段对物种进行快速而准确的分子生物学水平的鉴定。2005年，国际已开始合作实施鱼类生命条形码计划(FISH-BOL)，该计划是以电子数据库形式构建含有DNA条形码图像和地理坐标的全球鱼类参考标准数据库。Ward等人利用条形码方法对澳大利亚超过200种海洋鱼类和印度洋沿岸35种鱼类进行分析，研究表明南非与澳洲海域的鱼类之间存在较大差异，地域群系之间种内差异性显著，通过建立N-J进化树的分析结论表明，能够使用线粒体细胞色素氧化酶亚基I(CytochromeOxidase subunit I,COI)作为海洋鱼类的DNA条形码标准序列。DNA条形码技术近年在海洋鱼类的鉴定上取得较好的鉴定效果，但鉴定对象多为新鲜或是冰冻鱼类，这些鱼类大多细胞组织保存完好，而针对市售鱼翅的DNA条形码鉴定鲜有报道。

并且，由于鱼翅制品属于致密结缔组织，自身含有丰富的硫酸多糖，多糖的去除一直是DNA提取过程中面临的主要难题，传统提取方法获得的DNA纯度低，往往造成后续分子生物学实验的失败，所以高效的提取鱼翅DNA也是DNA条形码技术顺利进行的前提。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种鉴别鱼翅种的DNA条形码引物对、试剂盒及方法，本发明的试剂及方法提取的DNA含量高，更适合作为鱼翅的DNA条形码技术中的DNA提取方法；本发明的DNA条形码能准确鉴别市场上流通的干鱼翅的种属，为鱼翅制品的鉴定提供分子生物学基础。

本发明的第一个目的是提供一种鉴别鱼翅种的DNA条形码引物对，所述的引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的引物对的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明的第二个目的是提供一种鉴别鱼翅种的DNA条形码试剂盒，所述的试剂盒包含所述的鉴别鱼翅种的DNA条形码引物对。

优选，所述的试剂盒还包含DNeasy mericon Food Kit DNA提取试剂盒。该DNeasymericon Food Kit DNA提取试剂盒是QIAGEN公司生产的。

本发明的第三个目的是提供一种鉴别鱼翅种的DNA条形码方法，包括以下步骤：

a.提取待测鱼翅样品的DNA；

b.利用所述的鉴别鱼翅种的DNA条形码引物对对待测鱼翅样品DNA进行PCR扩增；

c.对PCR产物进行测通及拼接获取COI序列，将获得的COI序列进行数据库比对及聚类分析鉴定，确定待测鱼翅样品的种属。

优选，所述的鱼翅种包括低鳍真鲨、大青鲨、尖吻鲭鲨、尖吻斜锯牙鲨、路氏双髻鲨、犁头鳐、丝鲨、无沟双髻鲨、尖齿柠檬鲨、舒氏星鲨、高鳍真鲨、浅海长尾鲨和沙拉真鲨。