本发明公开了一种鉴别鱼翅种的DNA条形码引物对、试剂盒及方法。本发明的引物对的上、下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示,利用该引物对对待测鱼翅样品DNA进行PCR扩增,然后对PCR产物进行测通及拼接获取COI序列,将获得的COI序列进行数据库比对及聚类分析鉴定,从而确定待测鱼翅样品的种属。本发明的引物对能够鉴别13种鱼翅物种,分子系统发育树显示,同一个物种的不同个体基本都能形成单系,节点支持率为99%~100%,聚类分析显示,同一物种都位于同一个分支,且不同个体的鱼类的COI序列相似度均大于95%;该方法可为市场流通的鱼翅制品的鉴定提供分子生物学基础。