[发明专利]一种对干扰素IFN α-2b进行定点聚乙二醇长效化修饰的方法

权利要求书

1.一种对干扰素IFN α-2b进行定点聚乙二醇长效化修饰的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）使用带有功能性官能团的固体载体对谷氨酰胺转氨酶进行固定，制得固定化的谷氨酰胺转氨酶；所述功能性官能团包括可以与酶大分子上的伯胺基团发生化学反应的羧基、醛基、环氧基、琥珀酰亚胺基中的一种；

2）首先将干扰素IFN α-2b溶于磷酸缓冲液中形成浓度为1.5 mg/mL的蛋白质溶液，在蛋白质溶液中加入带有伯胺基团的聚乙二醇搅拌使其完全溶解，然后加入固定化的谷氨酰胺转氨酶，搅拌反应5 h，然后加入碘乙酰胺使反应停止，得到的反应产物使用pH 7.4、浓度10 mM的磷酸缓冲液稀释至蛋白质浓度为1.0 mg/mL的溶液，然后使用pH 7.4、浓度10 mM的磷酸缓冲液进行两次透析得到定点聚乙二醇化的干扰素IFN α-2b。

2.根据权利要求1所述的一种对干扰素IFN α-2b进行定点聚乙二醇长效化修饰的方法，其特征在于，所述步骤1）中固体载体包括多孔微球、多孔膜、多孔纤维、多孔凝胶中的一种。

3.根据权利要求1所述的一种对干扰素IFN α-2b进行定点聚乙二醇长效化修饰的方法，其特征在于，所述步骤2）中聚乙二醇的分子量包括5 kD、10 kD、20 kD、40 kD中的一种，其分子链结构类型包括有直链型、分支型和多臂型中的一种。

4.根据权利要求1所述的一种对干扰素IFN α-2b进行定点聚乙二醇长效化修饰的方法，其特征在于，所述步骤2）中干扰素IFN α-2b与带有伯胺基团的聚乙二醇其摩尔比为1:1~1.05。

5.根据权利要求1所述的一种对干扰素IFN α-2b进行定点聚乙二醇长效化修饰的方法，其特征在于，所述步骤2）中干扰素IFN α-2b、伯胺基团的聚乙二醇与固定化的谷氨酰胺转氨酶在37±0.5°C搅拌反应。

6.根据权利要求1所述的一种对干扰素IFN α-2b进行定点聚乙二醇长效化修饰的方法，其特征在于，所述步骤2）中透析在4±0.5°C进行。

7.根据权利要求1所述的一种对干扰素IFN α-2b进行定点聚乙二醇长效化修饰的方法，其特征在于，所述步骤2）中所得到的固定化谷氨酰胺转氨酶通过洗涤进行再次重复使用。