[发明专利]用于检测病毒与人基因HPV58-CMAHP融合突变的引物组合、试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.用于检测人肿瘤组织中HPV58-CMAHP融合突变的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的序列，分别如下：HPV58-CMAHP Left Primer：5’-GGTGGGGGCTAGTTCAGATG-3’（SEQ ID NO:1）；HPV58-CMAHP Right Primer：5’-GGTAGGACAGCTCCCAAACC-3’（SEQ ID NO:2）；所述引物组合配合使用特异性探针，所述特异性探针序列如SEQ ID NO:3所示，如下：HPV58-CMAHP-P ：5’-GAATGGATAGATAGATGTGC-3’（SEQ ID NO:3），其5’端修饰有FAM或VIC，3’端修饰有NFQ-MGB。

2.用于检测人肿瘤组织中HPV58-CMAHP融合突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1所述的引物组合。

3.根据权利要求2所述的用于检测人肿瘤组织中HPV58-CMAHP融合突变的试剂盒，其特征在于，试剂盒还含有权利要求1所述的特异性探针。

4.根据权利要求3所述的用于检测人肿瘤组织中HPV58-CMAHP融合突变的试剂盒，其特征在于，试剂盒还含有质控系统，所述质控系统包含质控引物和质控探针，质控引物的序列如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示，分别如下：ATP6IP1 Left Primer：5’-AGTGGAGGCTGAGGCTATGA-3’（SEQ ID NO:4），ATP6IP1 Right Primer：5’-GAGGCTGGCATTGAGCTTCA-3’（SEQ ID NO:5）；所述质控探针的序列如SEQ ID NO:6所示，如下：ATP6IP1-P：5’-GGCTGCCGGTGTTTTTGTC-3’（SEQ ID NO:6） ；试剂盒的质控探针的5’端修饰有FAM或VIC，3’端修饰有NFQ-MGB。

5.根据权利要求4所述的用于检测人肿瘤组织中HPV58-CMAHP融合突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还含有阳性对照液和空白对照液，所述阳性对照液为含有HPV58-CMAHP的质粒DNA，所述空白对照为Tris缓冲液。

6.根据权利要求2-5任意一项所述的用于检测人肿瘤组织中HPV58-CMAHP融合突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR缓冲液，HotStart Taq酶和UNG酶。

7.一种根据权利要求6所述用于检测人肿瘤组织中HPV58-CMAHP融合突变的试剂盒的使用方法，方法包括以下步骤：

（1）提取检测样本中的RNA,所述样本来自新鲜样本；

（2）将提取的RNA逆转录为cDNA，以cDNA为模板进行实时荧光PCR扩增反应；

（3）根据荧光PCR扩增仪显示的Ct值判断检测结果：监测反应体系的FAM和VIC荧光强度，以FAM达到设定的阈值时所需要的循环次数Ct值作为阴阳性判定标准，Ct值大于等于38：阴性；，Ct值小于38：阳性。

8.根据权利要求7所述的用于检测人肿瘤组织中HPV58-CMAHP融合突变的试剂盒的使用方法，其特征在于，试剂盒还包括PCR扩增反应的反应体系，其成分如下：PCR缓冲液：15 µL，引物：1 µM，探针：0.5 µM，Taq酶：1.0U，UNG酶：0.5U，逆转录产物cDNA：2 µL，水：余量，总量：25 µL。