[发明专利]一种发酵生产星孢菌素的方法

说明书

本发明公开了一种发酵生产星孢菌素的方法。所述的方法包括：(1)使用发酵培养基培养星孢菌素产生菌24～60小时；(2)继续培养并流加碳源和氮源；所述碳源的流加速率为0.4～2g/L·h^‑1，且所述氮源的流加速率为0.12～0.36g/L·h^‑1；所述星孢菌素的培养时间共96～240小时；所述的发酵培养基所包含的组分详见本发明。本发明创造性地通过特定时间流加碳源和氮源提高目标化合物产量，本发明的方法使用到的葡萄糖和酵母提取物成本低，无污染且操作过程方便并无需特殊仪器设备即可实现大幅度提高星孢菌素产量的效果。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种发酵生产星孢菌素的方法。

背景技术

星孢菌素(stauroporine，ST)是一种生物碱，1977年由日本学者Omura首先在链霉菌Streptomyces AM-2282中分离得到。ST具有蛋白激酶(PKC)抑制活性，是一种抗肿瘤化合物。然而由于ST选择性差及毒性较大的原因，使得其无法直接成药，需要对其进行结构修饰。米哚妥林(Midostaurin,PKC412)是由ST经过化学合成得到的一种高效、新型的抗肿瘤药物，当米哚妥林与化疗联用时，患者的生存期比单纯化疗组延长两倍。由于米哚妥林优良的抗肿瘤疗效，FDA给与其突破性疗法认定、孤儿药资格和优先审评资格，并于2017年5月批准其用于FLT3突变的急性髓系白血病(AML)的治疗，这也是25年来首个用于AML适应症的药物。与此同时米哚妥林也被FDA批准用于成人侵袭性系统性肥大细胞增多症(ASM)、伴有血液肿瘤的系统性肥大细胞增多症(SM-AHN)和肥大细胞白血病(MCL)的治疗。

目前米哚妥林的生产方法主要由ST通过一步化学反应进行合成(见式I)，目前主要存在ST产量低、价格高的问题，这可能是米哚妥林目前价格居高不下的原因之一。

现有技术中，专利CN 101397540 B公布的星孢菌素生产方法虽然能够一定程度提升星孢菌素的产量，但星孢菌素产量依然处于一个较低的水平。本发明直接在发酵罐基础上进行流加补料研究，显著提高了星孢菌素产量并且操作更具备工业化生产价值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为克服现有技术中存在的星孢菌素产量低的缺陷，提供一种发酵生产星孢菌素的方法。本发明的发酵生产星孢菌素的方法产量相比于现有技术有大幅度的提高，且降低了星孢菌素的生产成本，从而为米哚妥林的低成本大规模量产提供基础。

本发明通过以下技术方案解决以上技术问题。

本发明提供一种发酵生产星孢菌素的方法，所述的方法包括：

(1)使用发酵培养基培养星孢菌素产生菌24～60小时；

(2)继续培养并流加碳源和氮源；所述碳源的流加速率为0.4～2g/L·h^-1，且所述氮源的流加速率为0.12～0.36g/L·h^-1；

所述的发酵培养基包含如下组分：葡萄糖2～4％、黄豆饼粉0.5～3％、玉米淀粉0.5～3％、棉籽淀粉0.5～3％、硝酸钾0.05～0.2％、硫酸镁0.05～0.3％、脯氨酸0.02～0.15％以及苏氨酸0.02～0.15％，pH 6～6.5；所述的百分比为占所述发酵培养基的质量百分比；

所述星孢菌素的培养时间共96～240小时。

较佳地，所述的葡萄糖的含量为2.5％～3.5％，例如3％。

较佳地，所述的黄豆饼粉的含量为1％或2％。

较佳地，所述的玉米淀粉的含量为1～2.5％，例如2％。

较佳地，所述的棉籽淀粉的含量为1.5％或2％。