[发明专利]一种不对称扩增靶核酸的方法

权利要求书

1.一种扩增样品中的一种或多种靶核酸的非诊断和治疗目的的方法，其包括，

(1)提供含有一种或多种靶核酸的样品；和，提供通用引物，以及，针对每一种待扩增的靶核酸，提供一个靶特异性引物对；其中，

所述通用引物包含第一通用序列；

所述靶特异性引物对能够扩增所述靶核酸，并且包含一个正向引物和一个反向引物，其中，所述正向引物包含第二通用序列和特异于所述靶核酸的正向核苷酸序列，且所述正向核苷酸序列位于第二通用序列的3'端；所述反向引物包含第一通用序列和特异于所述靶核酸的反向核苷酸序列，且所述反向核苷酸序列位于第一通用序列的3'端；并且，在允许核酸杂交或退火的条件下，所述第一通用序列能够与所述第二通用序列的互补序列杂交或退火，且所述第二通用序列与所述第一通用序列存在差异，所述差异包括位于第一通用序列3'端的一个或多个核苷酸各自独立地被缺失或置换；并且，所述第一通用序列不能与所述正向引物的互补序列完全互补；和

(2)在允许核酸扩增的条件下，使用所述通用引物以及所述靶特异性引物对，通过PCR反应扩增样品中的靶核酸。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述方法具有选自下列的一个或多个技术特征：

(1)所述方法用于扩增1-5个，5-10个，10-15个，15-20个，20-50个或更多个靶核酸；

(2)在所述方法的步骤(1)中，提供1-5个，5-10个，10-15个，15-20个，20-50个或更多个靶特异性引物对；

(3)在所述方法的步骤(2)中，所述通用引物的工作浓度高于所述靶特异性引物对的正向引物和反向引物的工作浓度；

(4)在所述方法的步骤(2)中，所述靶特异性引物对的正向引物和反向引物的工作浓度是相同的或者不同的；

(5)所述样品或靶核酸包含mRNA，且在进行所述方法的步骤(2)之前，对所述样品进行逆转录反应；和

(6)在所述方法的步骤(2)中，使用核酸聚合酶来进行PCR反应。

3.如权利要求2所述的方法，其中，所述核酸聚合酶是模板依赖性核酸聚合酶。

4.如权利要求2所述的方法，其中，所述核酸聚合酶为DNA聚合酶。

5.如权利要求2所述的方法，其中，所述核酸聚合酶为热稳定的DNA聚合酶。

6.如权利要求5所述的方法，其中，所述热稳定的DNA聚合酶获自：Thermus aquaticus,Thermus thermophiles,Thermus filiformis,Thermis flavus,Thermococcusliteralis,Thermus antranildanii,Thermus caldophllus,Thermus chliarophilus,Thermus flavus,Thermus igniterrae,Thermus lacteus,Thermus oshimai,Thermusruber,Thermus rubens,Thermus scotoductus,Thermus silvanus,Thermusthermophllus,Thermotoga maritima,Thermotoga neapolitana,Thermosiphoafricanus,Thermococcus litoralis,Thermococcus barossi,Thermococcusgorgonarius,Thermotoga maritima,Thermotoga neapolitana,Thermosiphoafricanus,Pyrococcus woesei,Pyrococcus horikoshii,Pyrococcus abyssi,Pyrodictiumoccultum,Aquifexpyrophilus和Aquifex aeolieus。

7.如权利要求6所述的方法，其中，所述DNA聚合酶为Taq聚合酶。