[发明专利]一种用于免疫分析的高效氯氟氰菊酯半抗原、活化载体蛋白、完全抗原及多克隆抗体

权利要求书

1.一种高效氯氟氰菊酯半抗原的一步合成方法，其特征在于化学反应过程如下所示：

。

2.如权利要求1所述的一步合成方法，其特征在于，原料以mmol计，具体包括以下步骤：将1.5-2.5mmol高效氯氟氰菊酯装入反应容器中在冰水浴中冷却，然后加入3.5-4.5mmo1三甲基((三氟甲基)磺酰)硅烷，搅拌均匀；待高效氯氟氰菊酯完全溶解后，缓慢加水并对所得混合物进行搅拌；然后添加试剂对反应进行中和，用有机试剂萃取；将有机相混合并使用脱水试剂进行干燥，然后真空浓缩；产物使用硅胶柱分离，淋洗液为乙酸乙酯和正己烷的混合液。

3.如权利要求2所述的一步合成方法，其特征在于：

加入三甲基((三氟甲基)磺酰)硅烷后搅拌1-3min；和/或

将70-80μL的水在1.5-2.5min内缓慢加入，对所得混合物搅拌3-5h；和/或

用饱和的NaHCO₃溶液对反应进行中和；和/或

用有机试剂CH₂Cl₂萃取多次，每次用量为10-20mL；和/或

将有机相混合并使用过量的Na₂SO₄干燥；和/或

所述淋洗液中乙酸乙酯和正己烷的体积比为(35-65)∶(45-55)。

4.一种用于免疫分析的高效氯氟氰菊酯完全抗原的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)载体蛋白活化：将载体蛋白OVA在双蒸水中溶解，调节pH至8.0～8.5；然后缓慢加入琥珀酸酐；将pH＝8.0～9.0的混合溶液进行搅拌；用磷酸缓冲液透析，得到活化载体蛋白，然后保存；

2)半抗原蛋白偶联：将权利要求1-3之一所述方法所得的高效氯氟氰菊酯半抗原通过碳二亚胺法与活化载体蛋白偶联；得到半抗原-OVA偶联物，即高效氯氟氰菊酯完全抗原。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于：

所述载体蛋白在双蒸水中的浓度为45-55mg/mL；和/或

所述琥珀酸酐的加入量为载体蛋白质量的10-20％。

6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于：

所述混合溶液在20-30℃下连续搅拌2-4h；和/或

所述磷酸缓冲液中含0.05-0.15mol/L的NaCl。

7.一种用于免疫分析的高效氯氟氰菊酯多克隆抗体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：对一批小鼠腹腔分多次注射权利要求4-6之一所述方法制得的高效氯氟氰菊酯完全抗原；其中，第一次注射的同时注射完全弗氏佐剂；后续的注射用不完全弗氏佐剂代替完全弗氏佐剂；除首次注射外，小鼠均于每次注射后采血，以监测抗血清的效价；用酶联免疫吸附法测定各小鼠抗血清的效价，根据性能指标选择效价最高的抗血清，用蛋白A柱进一步纯化，最后将所得多克隆抗体储存备用。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述一批小鼠为10-20只6～8周的雌性BALB/c小鼠。

9.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述分多次注射为分4-6次注射高效氯氟氰菊酯完全抗原，每次间隔8-12天；每次注射150-250μL浓度为0.8-1.2毫克/毫升的高效氯氟氰菊酯完全抗原以及150-250μL完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂。

10.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述采血为每次注射后5-9天从小鼠尾静脉采血.。