[发明专利]乳酸克鲁维酵母菌水解人参皂苷生产人参皂苷CK提取物的方法

说明书

本发明公开一种乳酸克鲁维酵母菌水解人参皂苷生产人参皂苷CK提取物的方法，该方法将乳酸克鲁维酵母突变株XT1412接种于YPD液体培养基培养活化；然后转接在YPD液体培养基中发酵，离心收集上细胞；将收集的细胞用去离子水清洗2‑3次，溶于去离子水中制备悬浮细胞，然后破碎细胞离心，收集上清液，得到粗酶液；按重量体积比40～60g/L称取人参皂苷提取物和粗酶液；在温度为90‑100℃条件下搅拌反应，得到酵母水解人参皂苷CK提取物。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种乳酸克鲁维酵母菌水解人参皂苷生产人参皂苷CK提取物的方法。

背景技术

人参皂苷(Ginsenoside)是一种固醇类化合物，三萜皂苷。主要存在于人参属药材中。现已明确知道的人参皂苷单体约有40 余种，在人参中的含量在4％左右。日本科学家Akao证实大部分天然人参皂苷(如Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd等)在肠道中吸收很少，仅仅是“天然活性前体”，而人参皂苷CK(Ginsenoside Compound K,CK)才是真正被吸收和发挥生物活性作用的实体。人参皂苷CK 最初是人们在其他人参皂苷的微生物降解产物中所发现，因此曾经被一度认为是非天然的产物，直到2006-2007年，我国学者王继彦等和张伟云等相继报道在人参的花蕾和果实中分别检测到了人参皂苷CK，其含量分别为0.02％和0.04％，最终证实了其天然来源，而在人参的其他部位及红参中，迄今未见有该化合物的分离报道。

目前对人参皂苷CK的药理活性研究主要集中以下几个方面：首先发现它的抗肿瘤作用，比如通过诱导癌细胞凋亡，抑制转移诱导癌细胞凋亡，抑制转移和诱导血管再生来起到抗肿瘤作用，同时它还表现出了卓越的抗炎、抗过敏、抗皮肤衰老和抗糖尿病活性等药理活性。相对人参皂苷Rh2和Rg3，人参皂苷CK具有更好的水溶性、更优的生物利用度和更广泛的生理活性。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种乳酸克鲁维酵母菌水解人参皂苷生产人参皂苷CK提取物的方法，利用该乳酸克鲁维酵母菌酶液和人参皂苷在高温下水解反应，获得高浓度稀有人参皂苷CK提取物混合液，并用于化妆品领域的研究。

为实现上述目的，本发明所设计一种乳酸克鲁维酵母菌水解人参皂苷生产人参皂苷CK提取物的方法，包括以下步骤：

1)将乳酸克鲁维酵母突变株XT1412接种于YPD液体培养基培养活化；然后转接在YPD液体培养基中发酵，离心收集上细胞；其中，所述乳酸克鲁维酵母突变株XT1412，其命名为乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)XT1412，于2018年01月10日保藏于中国，武汉武汉大学，中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO：M 2018017；

2)将收集的细胞用去离子水清洗2-3次，溶于去离子水中制备悬浮细胞，然后破碎细胞离心，收集上清液，得到粗酶液；

3)按重量体积比40～60g/L称取人参皂苷和粗酶液；在温度为90-100℃条件下搅拌反应，得到酵母水解人参皂苷CK提取物；于-20℃保藏；其中，酵母水解人参皂苷CK提取物中人参皂苷CK 的含量为0.8-1.2％。

进一步地，所述步骤1)中，YPD液体培养基由以下步骤而成：

10克酵提取物和20克蛋白胨于900ml去离子水中，121℃灭菌20min；待冷却到60℃左右，加入50ml经过过滤除菌的40％葡萄糖溶液，混匀。

再进一步地，所述步骤3)中，人参皂苷和粗酶液的重量体积比40～60g/L；其中，人参皂苷含量为30～80％。

再进一步地，所述步骤4)中，搅拌反应条件为：温度为95℃，时间为1-3h。

再进一步地，所述酵母水解人参皂苷CK提取物中人参皂苷 CK的含量为1％。