[发明专利]基于高内涵成像系统的芳基磷酸酯类阻燃剂血管毒性的评价方法

权利要求书

1.基于高内涵成像系统的芳基磷酸酯类阻燃剂血管毒性的评价方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)获取芳基磷酸酯类阻燃剂处理的斑马鱼胚胎/幼鱼血管荧光图像；步骤1)中包括以下步骤：

1.1)上机：运行高内涵成像系统，载入装有芳基磷酸酯类阻燃剂处理的斑马鱼胚胎/幼鱼的96孔板；

1.2)设置预扫图像分析程序：识别488nm通道区域面积大于或等于100000像素并且荧光强度高于400，保存命名为“Findingfish”；

1.3)设置成像程序参数：

①选择5X物镜非共聚焦模式，488nm通道的参数设置：曝光时20ms、激光功率50％、拍摄高度500um，选中所有孔以及镜头，分析程序设置为“Findingfish”，保存好程序命名为“Pre”；

②选择10X物镜共聚焦模式，488nm的参数设置：曝光时间300ms、激光功率100％，以及明场的参数设置：曝光时间20ms、激光功率50％、拍摄高度500um双通道，层扫模式的参数：起始处为300um，20um/层，20层，选中所有孔以及镜头，保存好程序命名为“Re”；

1.4)成像与图像保存：使用预扫模式，分别载入“Pre”以及“Re”两个程序，命名实验名称，运行程序进行高内涵全自动成像，选择荧光增强模式，以bmp格式保存斑马鱼胚胎或幼鱼血管荧光图并按编号命名；

2)血管图像分割识别与分析；所述血管图像分割识别与分析运用Photoshop及Matlab两款软件，通过录制宏与编写算法对目标血管进行批量半自动识别、输出与分析形态学的参数改变；

3)获得评价和筛选结果。

2.如权利要求1所述的芳基磷酸酯类阻燃剂血管毒性的评价方法，其特征在于：步骤1)中，利用高内涵成像系统获取特异性血管荧光标记的整体转基因斑马鱼胚胎/幼鱼血管图像。

3.如权利要求1所述的芳基磷酸酯类阻燃剂血管毒性的评价方法，其特征在于：步骤2)中，所述目标血管分割方法，为选取肠下静脉丛和尾静脉末端作为目标血管，联合两种血管参数进行评价与筛选。

4.如权利要求1所述的血管毒性的评价方法，其特征在于：步骤2)中，所述目标血管分割方法，为人工分割出包含目标血管的区域，结合Photoshop宏录制工具，半自动批量地对图像中的目标血管进行简单的区域分割与图像保存。

5.如权利要求1所述的芳基磷酸酯类阻燃剂血管毒性的评价方法，其特征在于：步骤2)中，所述血管图像识别与分析方法，为于Matlab软件平台编写目标血管轮廓自动识别算法，能够批量输出血管形态学参数。

6.如权利要求5所述的芳基磷酸酯类阻燃剂血管毒性的评价方法，其特征在于：步骤2)中，所述目标血管轮廓自动识别算法，为选取包括血管面积、周长、血管网格数、圆度、椭圆度、外接最小矩形长和宽的形态学参数作为算法输出结果。

7.权利要求1-6中任一项所述的基于高内涵成像系统的芳基磷酸酯类阻燃剂血管毒性的评价方法在评价芳基磷酸酯类阻燃剂血管潜在风险中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，包括步骤：

利用高内涵成像系统获取特异性血管荧光标记的转基因斑马鱼胚胎/幼鱼血管图像，并运用Photoshop及Matlab软件对图像中心包和目标血管进行半自动识别分析形态学参数改变，快速准确地对磷系阻燃剂化合物进行心血管毒性评价与筛选。