[发明专利]一种嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和细胞药物

说明书

本发明公开了一种嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和细胞药物，涉及CAR‑T细胞治疗技术领域。本发明公开的合抗原受体T细胞表达靶向肿瘤相关抗原的嵌合抗原受体且所述嵌合抗原受体T细胞的4.1R基因被敲除或其表达受到抑制。本发明公开的嵌合抗原受体T细胞的效应性CAR‑T细胞的比例更高，可释放更强的细胞效应因子，具有更好的肿瘤细胞杀伤能力，为肿瘤治疗提供了新的方向和思路。

技术领域

本发明涉及CAR-T细胞治疗技术领域，具体而言，涉及一种嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和细胞药物。

背景技术

癌症在我国疾病致死原因当中排名第2位，仅次于脑血管疾病。目前我国有700多万癌症患者，且每年新增约180万人，同时每年有超过160万人死于癌症。随着科技和医学的发展，针对肿瘤的治疗方案也有很多。比如，手术切除和放化疗等，这些方法对于早期肿瘤的治疗效果较好，能够明显的缓解肿瘤病人的症状，延长生存时间。但是，这些方法对于患者人体的创伤较大，并且有严重的不良反应。近年来，随着肿瘤免疫治疗的发展，嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)治疗肿瘤逐渐进入临床试验，并且在治疗恶性血液病取得了较好的成果。然而，CAR-T对治疗实体瘤的效果较差，因为受到组织结构，强大的免疫抑制环境所限制，除此之外，缺乏特异性也是CAR-T治疗实体瘤的效果较差的关键因素之一。因此，寻找更有效靶点从而推进CAR-T治疗实体瘤是现阶段的一大重要挑战。

此外，现有的CAR-T细胞在其治疗实体瘤的效果有限，有待进一步提高。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的嵌合抗原受体T细胞、嵌合抗原受体T细胞的方法和细胞药物。本发明提供的嵌合抗原受体T细胞的效应性CAR-T细胞的比例更高，可释放更强的细胞效应因子，具有更好的肿瘤细胞杀伤能力。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明实施例提供一种嵌合抗原受体T细胞，上述嵌合抗原受体T细胞表达靶向肿瘤相关抗原的嵌合抗原受体且上述嵌合抗原受体T细胞的4.1R基因被敲除或其表达受到抑制。

蛋白4.1家族，最初因其在红细胞膜蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中位置处在第4.1个条带处而得名，包括4.1R，4.1N，4.1B和4.1G。

本发明实施例的研究内容首次揭示，在嵌合抗原受体T细胞中抑制4.1R蛋白的表达，该嵌合抗原受体T细胞对肿瘤细胞的杀伤能力得到有效提高，本发明为采用嵌合抗原受体T细胞治疗肿瘤提供了新的方向和思路。

基于本发明实施例的内容，本领域技术人员容易理解到抑制或敲除嵌合抗原受体T细胞的4.1R基因也能取得相似的抗肿瘤能力提高的技术效果。

在可选的实施方式中，上述4.1R基因的表达通过如下分子中的任意一种或几种的组合被抑制：shRNA、反义RNA、siRNA和antagomir；或者，上述嵌合抗原受体T细胞的4.1R基因通过如下技术中的任意一种被敲除：CRISPR/Cas9技术、ZFN技术和TALEN技术。

基于本发明实施例的内容，本领域技术人员能够想到采用本领域技术常见的技术对嵌合抗原受体T细胞进行改造，以使其4.1R基因的表达受到抑制，或敲除4.1R基因，无论通过何种技术得到的嵌合抗原受体T细胞，只要其4.1R基因被抑制表达或被敲除即属于本发明的保护范围。

在可选的实施方式中，上述嵌合抗原受体T细胞含有shRNA分子，上述4.1R基因的表达通过上述shRNA分子受到抑制。

在可选的实施方式中，上述shRNA分子的靶序列如SEQ ID NO.1、所示。

本发明实施例的内容显示，利用shRNA分子靶向4.1R基因上如SEQ ID NO.1处的靶序列，4.1R基因表现出被抑制的效果，相应的嵌合抗原受体T细胞均有抗肿瘤能力提高的表现。