[发明专利]一种嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和细胞药物

权利要求书

1.一种嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体T细胞表达靶向肿瘤相关抗原的嵌合抗原受体且所述嵌合抗原受体T细胞的4.1R基因被敲除或其表达受到抑制。

2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述4.1R基因的表达通过如下分子中的任意一种或几种的组合被抑制：shRNA、反义RNA、siRNA和antagomir；或者，所述嵌合抗原受体T细胞的4.1R基因通过如下技术中的任意一种被敲除：CRISPR/Cas9技术、ZFN技术和TALEN技术。

3.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体T细胞含有shRNA分子，所述4.1R基因的表达通过所述shRNA分子受到抑制。

4.根据权利要求3所述的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述shRNA分子的靶序列如SEQ ID NO.1所示；

优选地，所述shRNA分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示。

5.根据权利要求1-4任一项所述的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述肿瘤相关抗原选自NKG2D配体和CD19中的任意一种；

所述嵌合抗原受体的抗原结合结构域能够特异性结合所述肿瘤相关抗原；

优选地，当所述肿瘤相关抗原为NKG2D配体时，所述嵌合抗原受体的抗原结合结构域为NKG2D蛋白，或者是选自NKG2D蛋白的具有结合活性的片段；

当所述肿瘤相关抗原为CD19时，所述抗原结合结构域为抗CD19的scFv；

优选地，所述NKG2D配体选自MICA、MICB、ULBP1、ULBP 2、ULBP 3、ULBP 4、ULBP 5和ULBP6中的任意一种。

6.根据权利要求5所述的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述肿瘤相关抗原为NKG2D配体，所述抗原结合结构域为选自NKG2D蛋白的胞外段；

优选地，所述NKG2D蛋白的胞外段的氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示。

7.根据权利要求5所述的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，

所述嵌合抗原受体还具有跨膜结构域和共刺激信号传导区；

所述跨膜结构域选自：CD8、CD28、CD33、CD37、CD8α、CD5、CD16、ICOS、CD9、CD22、CD134、CD137、CD154、CD19、CD45、CD4和CD3ε中的一种或多种的跨膜结构域；

优选地，所述跨膜结构域选自CD8的跨膜结构域；

优选地，所述共刺激信号传导区包含共刺激分子的细胞内结构域，所述共刺激分子选自：CD27、CD3ζ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、CD66d、CD2、CD4、CD5、CD28、CD30、CD40、CD134、CD137、ICOS、CD154、4-1BB、OX40、CD7、LIGHT、NKG2C和B7-H3中的一种或多种；

优选地，所述共刺激信号传导区包括4-1BB的细胞内结构域和CD3ζ的细胞内结构域。

8.一种制备如权利要求1-7任一项所述的嵌合抗原受体T细胞的方法，其特征在于，其包括如下步骤：抑制嵌合抗原受体T细胞的4.1R基因的表达或敲除所述嵌合抗原受体T细胞的4.1R基因。

9.一种细胞药物，其特征在于，其含有作为活性成分的如权利要求1-7任一项所述的嵌合抗原受体T细胞以及药学上可接受的辅料。

10.根据权利要求9所述的细胞药物，其特征在于，所述细胞药物用于治疗肿瘤；

优选地，所述肿瘤选自实体瘤或非实体瘤；

优选地，所述实体瘤为特异性表达NKG2D配体的肿瘤；

优选地，所述实体瘤选自胰腺癌、肝癌、直肠癌、胃癌和乳腺癌中的任意一种；

优选地，所述非实体瘤选自特异性表达CD19的肿瘤；

优选地，所述非实体瘤为淋巴瘤。