[发明专利]用于鉴别结核分枝杆菌和龟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌的膜条及制备和使用方法

说明书

本发明属于微生物基因检测领域，具体涉及一种用于鉴别结核分枝杆菌和龟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌的膜条及制备和使用方法；所述的特异性探针包括用于检测结核分枝杆菌的碱基序列SEQ ID NO.1‑2；用于检测龟分枝杆菌的碱基序列SEQ ID NO.3‑4；用于检测脓肿分枝杆菌的碱基序列SEQ ID NO.5‑6以及分枝杆菌属质控探针SEQ ID NO.7‑8；对应的引物对为SEQ ID NO.9‑10。本申请建立起了一种快速、准确的区分结核分枝杆菌、龟、脓肿分枝杆菌的检测方法，可作为一种市场化分枝杆菌菌种鉴定试剂盒的有益补充鉴定方法，具有良好的临床应用前景。

技术领域

本发明属于微生物基因检测领域，具体涉及一种用于鉴别结核分枝杆菌和龟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌的膜条及制备和使用方法。

背景技术

结核分枝杆菌(M.TB)感染引起的结核病仍是目前我国最常见的传染性疾病之一，而非结核分枝杆菌病是指除结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌以外的其他分枝杆菌感染引起相关组织、脏器的病变。伯杰系统细菌学手册根据非结核分枝杆菌(NTM)的生长速度将其分为快速生长型和缓慢生长型，其中我国快速生长型NTM所引起疾病中最常见的菌种类型是龟/脓肿分枝杆菌。目前已有市场化的检测分枝杆菌菌种的基因芯片试剂盒，采用检测16SrRNA基因序列的原理，探针采用荧光标记，但是却无法区分龟分枝杆菌和脓肿分枝杆菌，且需用比较昂贵的激光共聚焦扫描仪予以完成，操作步骤较复杂。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的缺陷，提供用于鉴别结核分枝杆菌和龟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌的膜条及制备和使用方法。

本发明为实现上述目的，采用以下技术方案：

一种用于鉴别结核分枝杆菌的膜条，包括膜条基体以及固定在所述的膜条上的特异性探针；碱基序列SEQ ID NO.1-2；对应的引物对为SEQ ID NO.9-10。

一种用于鉴别龟分枝杆菌的膜条，包括膜条基体以及固定在所述的膜条上的特异性探针；碱基序列SEQ ID NO.3-4；对应的引物对为SEQ ID NO.9-10。

一种用于鉴别脓肿分枝杆菌的膜条，包括膜条基体以及固定在所述的膜条上的特异性探针；碱基序列SEQ ID NO.5-6；对应的引物对为SEQ ID NO.9-10。

一种用于鉴别分枝杆菌属质控探针的膜条，包括膜条基体以及固定在所述的膜条上的特异性探针；碱基序列SEQ ID NO.7-8；对应的引物对为SEQ ID NO.9-10。

一种用于鉴别结核分枝杆菌和龟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌的膜条，包括膜条基体以及固定在所述的膜条上的特异性探针；所述的特异性探针包括用于检测结核分枝杆菌的碱基序列SEQ ID NO.1-2；用于检测龟分枝杆菌的碱基序列SEQ ID NO.3-4；用于检测脓肿分枝杆菌的碱基序列SEQ ID NO.5-6以及分枝杆菌属质控探针SEQ ID NO.7-8。探针序列可由其碱基互补序列替换。

用于检测结核分枝杆菌(M.TB)的特异性寡核苷酸探针，其碱基序列如SEQ IDNO.1-2任意一项所示：

M.Tb1:GCCCACTACAGACAAGAACCCCTCA(SEQ ID NO.1)

M.Tb2:CGTATCCATTGATGCTCGCAACCAC(SEQ ID NO.2)

用于检测龟分枝杆菌(M.Che)的特异性寡核苷酸探针，其碱基序列SEQ ID NO.3-4任意一项所示：

M.Che1:CGTTTCAATTCTATTGACAGTTCGA(SEQ ID NO.3)

M.Che2:ACAGAAACTCGCTTTATGTTCCCAA(SEQ ID NO.4)