[发明专利]用于鉴别结核分枝杆菌和龟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌的膜条及制备和使用方法

权利要求书

1.一种用于鉴别结核分枝杆菌的膜条，其特征在于，包括膜条基体以及固定在所述的膜条上的特异性探针；碱基序列SEQ ID NO.1-2；对应的引物对为SEQ ID NO.9-10。

2.一种用于鉴别龟分枝杆菌的膜条，其特征在于，包括膜条基体以及固定在所述的膜条上的特异性探针；碱基序列SEQ ID NO.3-4；对应的引物对为SEQ ID NO.9-10。

3.一种用于鉴别脓肿分枝杆菌的膜条，其特征在于，包括膜条基体以及固定在所述的膜条上的特异性探针；碱基序列SEQ ID NO.5-6；对应的引物对为SEQ ID NO.9-10。

4.一种用于鉴别分枝杆菌属质控探针的膜条，其特征在于，包括膜条基体以及固定在所述的膜条上的特异性探针；碱基序列SEQ ID NO.7-8；对应的引物对为SEQ ID NO.9-10。

5.一种用于鉴别结核分枝杆菌和龟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌的膜条，其特征在于，包括引物对、膜条基体以及固定在所述的膜条上的特异性探针；所述的特异性探针包括用于检测结核分枝杆菌的碱基序列SEQ ID NO.1-2；用于检测龟分枝杆菌的碱基序列SEQ IDNO.3-4；用于检测脓肿分枝杆菌的碱基序列SEQ ID NO.5-6以及分枝杆菌属质控探针SEQID NO.7-8；对应的引物对为SEQ ID NO.9-10。

6.根据权利要求5所述的用于鉴别结核分枝杆菌和龟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌的膜条，其特征在于，所述的膜条基体为硝酸纤维素膜。

7.一种权利要求1-5任一项的膜条，其特征在于，所述的膜条长为6.0cm，宽为0.5cm，其中分枝杆菌属质控分子探针PC位于膜条上端以下1.0cm处，和/或结核分枝杆菌特异性分子探针M.TB位于膜条上端以下2.0cm处，和/或龟分枝杆菌特异性分子探针M.Che位于膜条上端以下3.0cm处，和/或脓肿分枝杆菌特异性分子探针M.Abs位于膜条上端以下4.0cm处。

8.一种权利要求7所述的膜条的制备方法，其特征在于，使用50mg/mL新鲜配置的EDC·HCL溶液完全浸泡膜条基体30-60min，蒸馏水洗膜，晾干；将膜条基体裁剪成条状，将膜条基体不同的探针液点在膜条基体上，80℃烤膜2-3h固定探针于膜上，即得检测膜条。

9.一种权利要求7所述的膜条的使用方法，其特征在于，包括下述步骤：

1)待测分枝杆菌核酸为模板，使用生物素标记后的ITS引物进行PCR扩增，得到的扩增产物即可用于核酸分子杂交；

2)将检测膜条放于塑料小槽中，先使用预杂交液预杂交40-60min，然后进行杂交，杂交前将步骤1)得到的50μl扩增产物95℃变性5min，将50μl扩增产物全部加入1ml杂交液中，置于小塑料槽中放入杂交仪杂交2-3h后，使用1×SSC溶液洗膜；NBT/BCIP显色10-30min，观察显色程度，适时将膜条放入去离子水中终止显色，拍照记录。

10.根据权利要求9所述的膜条的使用方法，其特征在于，步骤1)用于扩增的引物对为SEQ ID NO.9-10。