[发明专利]一种链球菌DNA酶B抗原及其应用

说明书

本发明公开了属于基因工程技术领域的一种链球菌DNA酶B抗原及其应用。所述的抗原，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。本发明的DNaseB抗原可以高效表达，具有高活性。利用该抗原建立的双抗原夹心法检测抗DNaseB抗体，灵敏度高，特异性好，适用于临床检验。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种链球菌DNA酶B抗原及其应用。

背景技术

A族链球菌(group A streptococci)，称A组溶血性链球菌或化脓性链球菌(streptococcus pyogenes)，是人类细菌感染中最重要的病原之一，引起的感染主要有急性咽炎、急性扁桃体炎，也可致肺部感染、猩红热、皮肤软组织感染，并可致全身性感染。该菌也是变态反应性疾病风湿热和急性肾小球肾炎的间接原因。近年来由A族链球菌所引起的严重感染的发病率明显增长，也引起了人们对该类细菌感染更大的关注。

链球菌溶血素“O”是A族链球菌产生的一种外毒素，能溶解红细胞，并对机体多种细胞有毒性作用，是A族链球菌的重要代谢产物之一，可刺激机体产生抗链球菌溶血素“O”，简称抗“O”或ASO，人体感染溶血性链球菌后，血清中可出现大量抗链球菌溶血素“O”抗体。检测抗链球菌溶血素“O”可作为链球菌感染后变态反应性疾病的辅助诊断。

链球菌DNA酶B(DNaseB)亦称链道酶S(DB)或MF，主要由A、C、G群链球菌产生的一种分泌蛋白，序列高度保守，能降解脓液中具高度粘稠性的DNA，使脓液稀释，促进病菌扩散。DNA酶B对人体有较强的抗原性，刺激机体产生相应抗体，即抗DNA酶B。抗DNA酶B检测是Jones标准所推荐的链球菌感染及其并发症的两种实验诊断方法之一。

当机体感染A族链球菌后，机体会产生大量的ASO与抗DNA酶B抗体，它们的抗体动力学相似，区别主要是ASO出现的时间较早，高峰维持的时间较短，一般3-5周达到高峰值，2个月后大多降为正常；而抗DNA酶B出现的时间较晚，该种抗体升高比较慢，高峰时间维持较长，一般维持时间长达3-6个月。由于ASO和抗DNA酶B不同的抗体动力学，因此对于急性A族链球菌感染如急性咽炎、急性扁桃体炎、急性风湿热等，ASO正处于高滴度状态，故应首选ASO；对于慢性感染及感染后引起的自身免疫性疾病，此时ASO滴度已降至正常，而抗DNA酶B却维持在高滴度状态，故应选择抗DNA酶B。由于目前风湿热患者临床表现多为轻微或不典型，加之人体对A族链球菌抗原反应并非均一，约25％的患者在被感染后，可以对某一抗原呈阴性反应，因此ASO和抗DNA酶B联合检测可提高阳性率。有研究证实在急性风湿热和活动期风湿性心脏病患者中，两者联合检测的阳性率均在90％左右，提示ASO和抗DNA酶B联合检测在风湿热的诊断中具有重要的临床价值，有广泛的推广意义。

目前，对于抗DNA酶B抗体的检测多采用天然DNaseB，然而，天然DNaseB的纯化工艺复杂，获取成本昂贵。首先发酵GAS以获取大量的含有分泌的DNaseB的培养液，不仅需要较长的生长周期，而且存在严重的安全隐患。其次，得到培养液后的纯化过程繁冗，得率也比较低。第三，天然粗提物包含已知的和未知的链球菌产物，会干扰检测结果并放大检测数据，是检测结果出现偏差，因而无法满足临床检测的需要。另一方面，目前商品化的抗DNA酶B抗体检测试剂多采用微量滴定法和免疫比浊法，不仅操作复杂，而且对抗体浓度变化不敏感。

发明内容

为了克服现有技术中的问题，

本发明首先提供了一种DNaseB抗原，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。

其次，本发明同时也提供了编码上述DNaseB抗原的核酸序列。

关于上述核酸序列，可选的，所述核酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示。

本发明同时也提供了表达上述的DNaseB抗原的表达载体和微生物。

关于上述微生物，可选的，所述微生物为细菌，进一步的，所述细菌为大肠杆菌。