[发明专利]猪肠病毒G型的实时荧光定量PCR检测引物及其试剂盒有效
| 申请号： | 201911046379.9 | 申请日： | 2019-10-30 |
| 公开（公告）号： | CN110607404B | 公开（公告）日： | 2023-02-03 |
| 发明（设计）人： | 欧阳康;杨春杰;刘雪婷;程振孔;米雪;陈樱;韦祖樟;黄伟坚 | 申请（专利权）人： | 广西大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 广西南宁公平知识产权代理有限公司 45104 | 代理人： | 杨立华 |
| 地址： | 530004 广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 肠病毒 实时 荧光 定量 pcr 检测 引物 及其 试剂盒 | ||
1.猪肠病毒G型的实时荧光定量PCR检测引物，其特征在于：包括上游引物qEV-G-F和下游引物qEV-G-R，它们分别为以下碱基序列：
上游引物qEV-G-F：5’-CTTGTGCATCCGGTTATGCC-3’；
下游引物qEV-G-R：5’-GCAAGCAGGCACAGAGAACGC-3’。
2.权利要求1所述的PCR检测引物在扩增猪肠病毒G型的ORF基因中的非诊断应用。
3.根据权利要求2所述的非诊断应用，其特征在于：所述扩增反应条件为95℃预变性120s；再以40个循环进行扩增，每循环以95℃15s变性，64℃延伸60s。
4.一种猪肠病毒G型的实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于含有上游引物qEV-G-F和下游引物qEV-G-R，它们分别为以下碱基序列：
上游引物qEV-G-F：5’-CTTGTGCATCCGGTTATGCC-3’；
下游引物qEV-G-R：5’-GCAAGCAGGCACAGAGAACGC-3’。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于包括以下试剂：阳性对照标准品、PCR反应液、阴性对照；所述阳性对照标准品为含有猪肠病毒G型基因序列的重组质粒，PCR反应液包括上游引物qEV-G-F和下游引物qEV-G-R、2x TB GreenTMPremix Ex TaqTMII，阴性对照为双蒸水。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述重组质粒以pMD18-T为载体。
7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述上游引物qEV-G-F和下游引物qEV-G-R的摩尔比为1：1。
8.权利要求4所述的试剂盒用于非诊断荧光定量PCR测定猪肠病毒G型的含量。
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