[发明专利]柑橘线粒体InDel分子标记及其应用

说明书

本发明公开了一组柑橘线粒体InDel分子标记及其应用，属于植物分子标记辅助种质资源鉴定技术领域。本发明的5对柑橘线粒体InDel分子标记引物序列如SEQ ID NO.1‑10所示，使用本发明的分子标记引物能够可快速、准确鉴定橘属、枳属和山金柑种质，能够鉴定柑橘原生质体融合后代线粒体来源，能够分析亲本未知柑橘品种母本来源。本发明在保护和利用野生柑橘资源上具重要意义。

技术领域

本发明属于植物分子标记辅助种质资源鉴定技术领域，具体涉及用于鉴定柑橘属、山金柑和枳属种质资源的一组线粒体InDel分子标记及其应用。

背景技术

柑橘是芸香科(Rutaceae)柑橘属植物，起源于我国喜马拉雅山脉，是世界第一大果树，也是我国南方最重要的果树。柑橘及其近缘属植物种类繁多，柑橘具有无融合生殖、无性系变异频繁等特点，而且不同的种属间易杂交，如柑橘属和枳属等植物可以互相杂交，柑橘属内植物更是杂交频繁，因此柑橘属植物核遗传背景更加复杂，核分子标记引物特异性差。同时细胞融合作为一项成熟的技术在柑橘育种中已取得不少研究成果，但由于缺乏可用于鉴别线粒体的分子标记，也存在着再生植株线粒体来源鉴定困难的问题。

目前各类分子标记已广泛用于柑橘研究，但应用较广的多为核基因组分子标记，线粒体分子标记较少。线粒体是动植物细胞内一种特殊的细胞器，拥有自己的基因组，在细胞生命活动中起着重要作用。线粒体DNA在有性生殖中具有母系遗传遗传现象，即子代线粒体DNA全部来自母本，不与父本发生交换重组。利用线粒体分子标记除可以区分品种、鉴别细胞融合后代线粒体基因来源外，在鉴定柑橘母本来源的应用上有着独特作用。同时线粒体DNA突变和重组率比核基因组低，使得基于线粒体基因组开发的分子标记比核基因组更加稳定可靠。但目前柑橘上使用的线粒体分子标记大多是根据拟南芥、油菜等作物的线粒体基因组开发得来，在柑橘上的应用范围窄，特异性差。

本发明利用柚(华柚1号)、葡萄柚(鸡尾葡萄柚)、宽皮橘(国庆1号温州蜜柑、鄂柑1号碰柑、默科特橘橙、红橘)、橙(冰糖橙、伏令夏橙、纽荷尔脐橙)、山金柑和枳的线粒体基因组开发了5对稳定可靠特异性强的柑橘线粒体的分子标记，通过简单的PCR反应和琼脂糖凝胶电泳即可区分柑橘属、枳属以及山金柑的线粒体基因组，可用于柑橘品种鉴定、谱系演化分析、分子辅助育种。

发明内容

本发明的目的在于提供5对利用利用柚(华柚1号)、葡萄柚(鸡尾葡萄柚)、宽皮橘(国庆1号温州蜜柑、鄂柑1号碰柑、默科特橘橙、红橘)、橙(冰糖橙、伏令夏橙、纽荷尔脐橙)、山金柑和枳的线粒体DNA开发得到的可快速、准确鉴定柑橘属、山金柑以及枳属种质资源的线粒体InDel分子标记引物及基于所述分子标记引物开发的产品。

本发明的目的还在于提供上述分子标记引物在鉴定柑橘及其近缘属(山金柑、枳属等)种质中的应用与方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

柑橘线粒体InDel分子标记引物，包括下述5对引物：

HBF：CCCGCCCTTAGGAGATTG，

HBR：TCCCTCGGACTCGGAAAG；

G1F：ACGCTTTGGTTAGGCTTGG，

G1R：GGCTCGAATGCCTTTACG；

ZKF：CCTCGTCGGATTCGTTCA，

ZKR：CACGGGTCATGCCTCAAT；

SJGF：GCGGTTGCACCGACTCAA，

SJGR：CTTGCTGGGCACGGTTTT；

BTCF：AAAGCACCGCTCGCTCAA，

BTCR：AATGGGTAACTCACGAACTAAAGAA。