[发明专利]一种体外评价卡介苗对中性粒细胞活性影响的方法

说明书

本发明公开了一种体外评价卡介苗对中性粒细胞活性影响的方法，至少包括如下步骤：提供培养板；在所述培养板上接种靶细胞；制备卡介苗悬液；将中性粒细胞和所述卡介苗悬液共同作用于所述靶细胞；向所述培养板中添加检测试剂。本发明在体外就可以确定中性粒细胞对卡介苗有无应答反应。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种体外评价卡介苗对中性粒细胞活性影响的方法。

背景技术

目前，若要确定卡介苗对癌细胞的作用效果，通常需要采用灌注法注入到人体中，这样会存在高的风险率，对人体有伤害。本发明提出一种体外评价卡介苗对中性粒细胞活性影响的方法，在体外就可以确定中性粒细胞对卡介苗有无应答反应，从而根据个体情况合理选择是否使用卡介苗。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种体外评价卡介苗对中性粒细胞活性影响的方法，能根据中性粒对靶细胞的作用活性，体外判断中性粒细胞对卡介苗有无应答，从而体外鉴定了卡介苗对个体的作用效果。

为了实现上述目的或者其他目的，本发明是通过以下技术方案实现的，一种体外评价卡介苗对中性粒细胞活性影响的方法，至少包括如下步骤：

提供培养板；

在所述培养板上接种靶细胞；

制备卡介苗悬液；

将中性粒细胞和所述卡介苗悬液共同作用于所述靶细胞；

向所述培养板中添加检测试剂；

检测所述培养板中吸光度的变化；

根据所述吸光度的变化评价所述卡介苗对中性粒细胞活性的影响。

在一实施例中，所述制备卡介苗悬液的步骤包括：

将卡介苗接种于液体培养基中进行培养；

测量所述液体培养基中的OD600值；

待所述OD600值达到2.0-2.1值或以上时，收集所述液体培养基中的卡介苗并进行离心处理，获得上清液和沉淀层；

吸弃所述上清液，通过细胞培养基重悬所述沉淀层，获得所述卡介苗悬液。

在一实施例中，在将所述卡介苗接种于所述液体培养基中后，培养条件为在35-37℃培养5-14天。

在一实施例中，所述细胞培养基与接种所述靶细胞的培养基为同一类型的培养基，接种所述靶细胞的培养基位于所述培养板内。

在一实施例中，获得所述中性粒细胞的步骤包括：

配制若干组浓度梯度的淋巴细胞分离液；

将所述若干组浓度梯度淋巴细胞分离液按照浓度从大到小的顺序加入到离心管中，使浓度最小的淋巴细胞分离液位于所述离心管的最上层；

采集1-2ml外周血并稀释1-3倍，获得稀释后的外周血；

取1-4ml所述稀释后的外周血加入到所述浓度最小的淋巴细胞分离液上；

利用所述若干组浓度梯度的淋巴细胞分离液，通过分离提取步骤获得所述中性粒细胞。

在一实施例中，所述淋巴细胞分离液的组数为5-8组。

在一实施例中，所述卡介苗悬液中的卡介苗、所述中性粒细胞和所述靶细胞之间的作用比例为(500-2000)：(3-20)：1。

在一实施例中，所述培养板为96孔细胞培养板。

在一实施例中，在所述培养板上接种靶细胞的步骤中，所述靶细胞的密度为8000-12000细胞/孔。