[发明专利]一种非洲猪瘟病毒荧光定量PCR现场快速检测试剂盒

权利要求书

1.一种非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括：缓冲液B1、缓冲液B2、PCR反应液、阳性对照和阴性对照；

所述缓冲液B1：用于快速裂解样品，释放病毒核酸；

所述缓冲液B2：用于稳定提取的病毒核酸，消除对PCR反应的抑制作用；

所述PCR反应液：由2×Premix Ex Taq^TM酶混合液和ASFV特异性的上下游引物以及荧光探针组成，其中酶混合液中添加有Tli RNaseH；引物、探针序列如下所示：

上游引物：5'-GCCGAAGGGAATGGATACTGA-3'

下游引物：5'-CCTATCACGGACGCAACGTA-3'

荧光探针：5'-FAM-ATAGCAAGGTTCACGTTCTCATTA–BHQ1-3'

反应阳性对照：为插入pMD-18T载体的一段长为171碱基对的人工合成DNA序列的重组体，即质粒，浓度为1.0×10³～1.0×10⁶copies/μL，用于PCR反应的阳性质控，扩增序列如下所示：

5'-gccgaagggaatggatactgagggaatagcaaggttcacgttctcattaaaccaaaagcgca acttaatccagagcgcaagagggggctgatagtatttaggggtttgaggtccattacagctgtaatga acattacgtcttatgtccagatacgttgcgtccgtgatagg-3'

阴性对照：用于PCR反应的阴性质控；

所述缓冲液B1的组分及终浓度为：异硫氰酸胍1-6M，氯化钠0.1-3M，乙二胺四乙酸0.01-0.5M，pH值为8.5-12.7；

所述缓冲液B2的组分及终浓度为：醋酸铵0.1-1.0M，Tris-Cl 0.01-1M，pH值为7.5-8.5。