[发明专利]检测过敏相关基因突变的引物组、探针组、试剂盒及用途

说明书

本发明公开了一种检测过敏相关基因突变的引物组、探针组、试剂盒及用途。本发明的引物组包含的各引物序列分别如SEQ ID NO.1～60所示。本发明的探针组包含的各探针序列分别如SEQ ID NO.61～90所示。本发明提供了一套可以检测与过敏相关25基因的扩增引物及探针与试剂盒，针对涉及到的每一个基因，设计了一对上下游引物用于基因扩增；针对每一个检测位点，设计了相应探针，用于单碱基扩增；本发明采用多重PCR核酸质谱飞行技术，快速、高精准、高灵敏地检测与过敏相关的25个基因的风险位点，可一次性、快速、高效、精确、高性价比地检测与过敏相关的25个基因的30个SNP位点多态性，达到过敏风险提醒的作用。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，更具体地，特别是涉及一套检测与过敏相关的25个基因突变的引物组、探针组及试剂盒，用于多重PCR飞行核酸质谱技术进行基因检测的方法。

背景技术

过敏是常见的自身免疫疾病，对人们的日常生活影响极大。对花粉过敏的患者，每年的春秋时节都受过敏症状的影响，表现出如皮肤红肿瘙痒、咳嗽打喷嚏等症状。食物过敏极易引发严重过敏反应，威胁患者生命安全，因而食物过敏患者日常生活中需特别注意饮食。而对于婴幼儿而言，不论是食物过敏(花生、牛奶、小麦麸质、鱼虾、桃子、坚果类食品等)还是环境过敏(花粉、尘螨、天然乳胶、宠物毛发等)，都严重威胁孩子健康和发育。此外，过敏还是具有职业倾向性，如医护人员容易对天然乳胶过敏，干扰医护人员工作的同时，也严重影响了他们的身体健康。

临床上，常见的过敏原检测多为皮试，部分过敏原可进行血液IgE含量的检测。但是，这些检测通常是在患者表现出严重过敏反应后进行的，这严重影响了人们的生命健康。特别是难以明确表述自己症状的婴幼儿，过敏严重损害了孩子的健康和发育。然而近年来，随着人类基因组计划的完成和二代测序的广泛应用，科学家们得以使用大样本进行META分析，探讨过敏表现与遗传信息多态性之间的关系，使得提前预知过敏风险成为可能。

其中，多重PCR核酸质谱飞行技术检测准确、快速，且检测相同数量SNP下性价比高，更适合进行较全面的过敏风险筛查。该技术包含以下优势：全部实验操作均在一个EP管中完成，大大降低样品污染的可能；可以进行多达40重的PCR反应和基因型检测；不涉及荧光标记和凝胶电泳等手段；根据扩增产物荷质比在电场中运动轨迹的差异检测目的片段基因型，检测灵敏度高、快速。

但是，该方法对引物特异性、引物组合有着较高的要求。如何在保证单管进行最多的多重反应基础上，针对每一个SNP位点，合理设计3种总碱基数不超过80bp的引物，避免特异性较低的引物产生非目的产物和交叉扩增，避免引物形成发卡结构等，是进行多个位点多态性检测的难点。

发明内容

本发明的主要目的就是针对以上现状，提供一种检测过敏相关基因突变的引物组及探针组，以克服现有技术中的不足。

本发明的另一主要目的在于提供一种检测过敏相关基因突变的试剂盒。

本发明的另一目的还在于提供前述试剂盒在检测过敏相关基因突变中的用途。

本发明的另一目的还在于提供一种检测过敏相关基因突变的方法。

为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

本发明实施例提供了一种检测过敏相关基因突变的引物组，其中所述过敏相关基因分别包括ADRB2、BDNF、CRHR1、CRHR2、FCER1A、FLG、FLG-AS1、GSDMB、HLA-DQB1、IL1R1、IL10、IL13、IL18、IL18R1、IL33、LRRC3C、MS4A2、PTGDR、RAD50、RTEL1、SERPINB7、STAT6、TMEM232、TNF和TSLP，所述引物组包括：

ADRB2基因的SNP位点为rs1042713，其引物对包括第一引物和第二引物，且所述第一引物的序列如SEQ ID NO.1所示，所述第二引物的序列如SEQ ID NO.2所示；